蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低溫保存技術(shù)及其遺傳變異分析.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低溫保存技術(shù)及其遺傳變異分析姓名：劉云國(guó)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王曉云2002.6.1(2)劉云國(guó)：蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低沮保存技術(shù)及其遺傳變異?ài)袎q其組成為MS40％甘油45％蔗糖lO％乙二薛10％DMSO(w／v)。單獨(dú)使用PVS3時(shí)以90rain的處理時(shí)間最佳。采用分步脫水，即將PVS3稀釋2倍和4倍后，分別處理25rain和30rain，然后再用PVS3

2、處理80rain的效果更好5試驗(yàn)結(jié)果表明，莖尖在液氮中的凍存時(shí)間不影響成活率。而不同的化凍方法對(duì)細(xì)胞活力影響較大，35～40“C的水浴化凍法得到的莖尖細(xì)胞活力最高，是較好的化凍方式?；瘍龊笥肕SI2too!L4的蔗糖溶液清洗浸泡30min清洗過(guò)的莖尖接種到去掉NH4的恢復(fù)培養(yǎng)基MSBA06mgL1NAA01nagL。GA305mgL“上，經(jīng)過(guò)20～30d的生長(zhǎng)遲滯期后，進(jìn)入正常生長(zhǎng)，同未經(jīng)凍存的對(duì)照生長(zhǎng)量一致。不同基因型的蘋果超低溫保存

3、耐受力不一樣，在試驗(yàn)的6個(gè)品種中，“世界一”的成活率最高(8J％)。6凍存后恢復(fù)生長(zhǎng)的小苗可以順利生長(zhǎng)、生根，其外部形態(tài)與生長(zhǎng)發(fā)育情況與對(duì)照植株未見(jiàn)差異比較對(duì)照與凍存再生苗葉片及莖的可溶性蛋白SDSPAGE譜帶及POD同工酶圖譜束發(fā)現(xiàn)差異，RAPD擴(kuò)增結(jié)果也來(lái)見(jiàn)有差異。這說(shuō)明凍存后再生植株在形態(tài)、生化和分子農(nóng)平上的遺傳穩(wěn)定性，初步證明了該保存方法應(yīng)用于蘋果種質(zhì)資源保存的可行性?！埃?，1，關(guān)鍵詞：蘋腳質(zhì)資源；莖尖；玻璃化法；超低溫保存；遺