少孢節(jié)叢孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食線蟲生化機(jī)制研究.pdf

1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文少孢節(jié)叢孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食線蟲生化機(jī)制研究姓名：王瑞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：楊曉野20080401普通營養(yǎng)菌絲；此外，普通營養(yǎng)菌絲總糖的含量為3 0 ．6 9 ％，高于含捕食器菌絲( 菌環(huán)和菌網(wǎng)) 2 4 ．7 7 ％的總糖含量。這表明捕食器菌絲的化學(xué)組成與普通營養(yǎng)菌絲是不一樣的，普通營養(yǎng)菌絲在變成捕食器時(shí)，蛋白質(zhì)、總糖及氨基酸等生化組分的含量均發(fā)生了

2、改變。‘( 5 ) 優(yōu)化了少孢節(jié)叢孢菌捕食器表面聚合物提取的方法，研究了某些化學(xué)試劑、酶和蛋白酶抑制劑對(duì)真菌生長和捕食作用的影響，初步了解了存在于捕食器表面并參與捕食過程的物質(zhì)種類及其作用，證實(shí)了表面聚合物在黏附線蟲時(shí)具有重要作用，而且這些物質(zhì)主要為蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)的化合物；同時(shí)還首次在含捕食器菌絲提取到的表面聚合物中，檢測到了蛋白酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶的活性，且其活性顯著高于普通營養(yǎng)菌絲，間接證實(shí)了上述酶類物質(zhì)可能在捕食過程中起關(guān)

3、鍵作用。( 6 ) 通過研究不同誘導(dǎo)劑物質(zhì)和不同營養(yǎng)組成的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的少孢節(jié)叢孢菌發(fā)酵液后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的組成成份和相關(guān)誘導(dǎo)劑能夠顯著影響少孢節(jié)叢孢菌的代謝過程；而且秀麗新桿線蟲刺激產(chǎn)生的培養(yǎng)基濾液和氨基酸刺激產(chǎn)生的培養(yǎng)濾液內(nèi)所含成分不同：蛋白酶活性越高的濾液中，磷酸酶活性越低。并且從秀麗新桿線蟲作刺激物的液體培養(yǎng)基L M Z 培養(yǎng)液中純化到一種絲氨酸蛋白酶，分子量約為3 8 K D a 左右，最適p H 值范圍和最適溫度分別為p

4、H 6 “ - 8 ．5 和5 0 “ C 。這種絲氨酸蛋白酶的純化為闡明捕食性真菌對(duì)線蟲的捕食機(jī)理和捕食作用提供了重要資料。( 7 ) 擴(kuò)增并分析了少孢節(jié)叢孢菌內(nèi)蒙古株( 彳．o l i g o s p o r aC H I M ) 胞外絲氨酸蛋白酶編碼基因的序列，所得序列全長為1 ．1 0 8 b p ，在片段中含有B s t X I 、D r a I I 、E c o R I 、S a c I 、S a l I 和X b a I

5、6 種限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)；少孢節(jié)叢孢菌C H I M 株絲氨酸蛋白酶基因與同種國外分離株和云南株的同源性分別為8 0 ．3 ％和8 4 ．1 ％：根據(jù)核苷酸推導(dǎo)的氨基酸序列同G e n B a n k 中發(fā)表的相應(yīng)氨基酸序列的同源性為1 0 0 ％。在線B l a s t n 分析， 證實(shí)我們擴(kuò)增所得的片斷是少孢節(jié)叢孢菌絲氨酸蛋白酶編碼基因的部分序列。又一次證實(shí)捕食線蟲性真菌一少孢節(jié)叢孢菌存在不同國家、地區(qū)株的差異。關(guān)鍵詞： 捕食線蟲