陰溝腸桿菌產 AmpC酶的表型及相關基因ampC和ampD的初步研究.pdf

1、陰溝腸桿菌(Enterobacter Cloacae，ECL)是一種常見的革蘭陰性條件致病菌，常引起呼吸道、泌尿生殖道以及傷口等的感染。近二十年來，隨著第三代、第四代頭孢菌素和免疫抑制劑等的使用及各種侵入性操作在臨床的廣泛應用，多重耐藥革蘭陰性桿菌引起的感染備受關注，其中以陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌為主的腸桿菌屬細菌已成為醫(yī)院感染中重要的致病菌。大量研究表明，高產AmpCβ-內酰胺酶(AmpC酶)是陰溝腸桿菌對青霉素類、第一至三代頭孢菌素、

2、頭霉素類和單環(huán)類耐藥的主要機制?？焖?、準確地檢測出高產AmpC酶的菌株，有利于指導臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物和院內感染控制的管理。
　　 目的：①使用多底物協(xié)同-拮抗法(multi-substrates synergy-antagonize test，MSSAT)檢測陰溝腸桿菌產AmpC酶的表型。②對陰溝腸桿菌ampC基因、ampD基因的攜帶情況以及AmpD的氨基酸替代位點與AmpC酶表型的關系進行初步研究。
　　 方法：

3、⑴收集天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院呼吸科微生物實驗室2006年1月至2009年6月期間臨床分離的陰溝腸桿菌，全部經生化反應重新鑒定；使用多底物協(xié)同-拮抗法(MSSAT)檢測陰溝腸桿菌產AmpC酶的表型。⑵通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增結構基因ampC和調節(jié)基因ampD的基因片段。不同表型的陰溝腸桿菌ampD基因的PCR擴增產物送DNA測序，結果與Kopp U報道的陰溝腸桿菌14的ampD基因序列(GenBank登錄號Z14003.1)進行比對，

4、分析ampD基因突變與AmpC酶表型的關系。
　　 結果：①2006年1月至2009年6月，從天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院呼吸科微生物實驗室收集的標本中分離出陰溝腸桿菌31株。來源于呼吸科病房18株，呼吸科門診7株，ICU病房6株。采用MSSAT方法檢測顯示陰溝腸桿菌不產AmpC酶2株(2/31，6.5％，痰標本1株，尿標本1株)，產高誘導型AmpC酶15株(15/31，48.4％，痰標本12株，尿標本2株，咽拭子標本1株)，產部分去阻

5、遏型AmpC酶9株(9/31，29.0％，均為痰標本)，產完全去阻遏型AmpC酶5株(5/31，16.1％，痰標本4株，尿標本1株)。②31株陰溝腸桿菌的結構基因ampC和調節(jié)基因ampD經PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳均檢測到相應目的片段的條帶。3株不同表型陰溝腸桿菌ampD基因片段均存在多處位點變異，對應氨基酸的替代位點分別為高誘導型Asp-59→Asn，Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Gln-103→

6、His，Thr-122→Ser，Glu-131→Gln，Lys-132→Gln，Val-136→Ile，Gln-138→His，Arg-143→Leu，Glu-160→Ala，His-175→Arg，Thr-179→Ala，Thr-180→Ala，Thr-187→Asn；部分去阻遏型Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Gln-103→His，Ala-128→Ser，Glu-131→Gln，Lys-132→G

7、ln，Val-134→Ala，Gln-138→Arg，Arg-143→Leu，Glu-160→Ala，Ser-172→Pro，His-175→Arg，Thr-180→Ala；完全去阻遏型Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Ala-158→Val，Ile-186→Thr。
　　 結論：⑴本研究選用陰溝腸桿菌31株，主要來源為呼吸科病房，主要標本為痰標本。本研究采用多底物協(xié)同-拮抗法鑒定出陰溝腸桿菌產A