Disulfiram聯(lián)合Cu通過(guò)調(diào)節(jié)ROS-JNK,NF-κB以及Nrf2通路誘導(dǎo)淋巴系腫瘤細(xì)胞凋亡.pdf

1、背景:急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)是血液系統(tǒng)惡性腫瘤中較為常見的疾病,其中T-ALL由于其易對(duì)髓外組織和器官的浸潤(rùn),緩解后極易復(fù)發(fā),治療還比較困難；而Burkitt’s淋巴瘤是一種侵襲性B細(xì)胞NHL,疾病進(jìn)展快,常規(guī)化療的效果不佳。隨著現(xiàn)代治療方法的改進(jìn)以及支持治療的加強(qiáng),大劑量多藥聯(lián)合化療提高了高危淋巴系腫瘤的完全緩解率(CR),但遠(yuǎn)期療效并不令人滿意,復(fù)發(fā)是治療失敗的主要原因,一旦復(fù)發(fā),再次緩解率低,預(yù)后差

2、。難治復(fù)發(fā)仍然是高危淋巴系腫瘤治療的主要障礙和亟待解決的難題,而耐藥是導(dǎo)致難治復(fù)發(fā)的重要因素。此外,大劑量多藥聯(lián)合化療的毒副作用導(dǎo)致嚴(yán)重并發(fā)癥也是影響高危淋巴系腫瘤療效進(jìn)一步提高的主要障礙之一,不少患者死于化療的并發(fā)癥而不是腫瘤的進(jìn)展。由于化療導(dǎo)致的系統(tǒng)性毒性和藥物耐藥是高危淋巴系腫瘤治療失敗的主要障礙,而新的分子靶向藥物也存在價(jià)格昂貴等問(wèn)題,從傳統(tǒng)價(jià)廉、且毒副作用小的藥物中開發(fā)具有抗腫瘤活性的cc新用途”越來(lái)越引起重視。
　　

3、 Disulfiram(DSF)是臨床應(yīng)用超過(guò)60年的抗酗酒藥物,安全性好,價(jià)格低廉。研究發(fā)現(xiàn)DSF單藥可以誘導(dǎo)一系列實(shí)體瘤細(xì)胞的凋亡及抑制其增殖,但是關(guān)于其對(duì)白血病細(xì)胞的作用尚存爭(zhēng)議。作為二價(jià)金屬離子螯合劑,DSF能夠強(qiáng)烈螯合Cu離子形成DSF/Cu復(fù)合物,體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Cu可顯著提高DSF誘導(dǎo)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡的作用。以往研究發(fā)現(xiàn)DSF誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制是抑制NF-κB的表達(dá),但關(guān)于DSF/Cu誘導(dǎo)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制尚不明確

4、。是否還有其他機(jī)制參與DSF/Cu誘導(dǎo)實(shí)體瘤細(xì)胞凋亡仍需要進(jìn)一步探索。
　　 藥物在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)也觸發(fā)了抗凋亡因子的產(chǎn)生,這是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥的重要機(jī)制。而NF-κB則是最主要的抗凋亡因子之一。NF-κB是包含p50和p65在內(nèi)的一種異二聚體。其中p65所占比例較多,且調(diào)控下游一系列抗凋亡基因的表達(dá),因此,p65被認(rèn)為是調(diào)控NF-κB活性的關(guān)鍵成分。抑制p65的活性可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,并且可以減少NF-κB調(diào)控的抗

5、凋亡因子的表達(dá)。而p65的過(guò)度表達(dá)可以誘導(dǎo)NF-κB持續(xù)活化引起細(xì)胞耐藥。
　　 ROS的產(chǎn)生是細(xì)胞呼吸作用的結(jié)果,在許多細(xì)胞生物學(xué)特性中,ROS的產(chǎn)生與一些病理過(guò)程有關(guān)。ROS可以誘導(dǎo)包括蛋白、磷脂以及DNA在內(nèi)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞。研究表明腫瘤細(xì)胞ROS水平略高于正常細(xì)胞,但由于有效的抗氧化機(jī)制的存在,腫瘤細(xì)胞對(duì)相對(duì)高水平的ROS是可以耐受。但當(dāng)各種因素導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的ROS水平超過(guò)其可耐受閾值則會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡,同時(shí)高水平的

6、ROS可破壞具有抗氧化作用的轉(zhuǎn)錄因子Nrf2活性,因而進(jìn)一步增強(qiáng)ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。此外,ROS與JNK通路在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡過(guò)程中可能存在相互促進(jìn)作用。
　　 近幾十年來(lái),Disulfiram(DSF)由于可以抑制醛脫氫酶而一直用于抗酗酒治療,副作用很小。而最近的研究則關(guān)注到DSF抗腫瘤的作用,已有不少的研究報(bào)道DSF聯(lián)合Cu可以誘導(dǎo)包括膠質(zhì)瘤、肺癌、黑色素瘤細(xì)胞在內(nèi)的許多實(shí)體瘤細(xì)胞的凋亡。而關(guān)于DSF/Cu對(duì)淋巴系腫瘤細(xì)胞

7、作用的研究報(bào)道較少。本課題旨在探討DSF/Cu能否有效殺傷人淋巴系腫瘤Molt4和Raji細(xì)胞株以及與ROS、JNK、Nrf2以及NF-κB通路的關(guān)系以及各通路之間的相互聯(lián)系。
　　 研究目的:本課題以人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Molt4以及B細(xì)胞淋巴瘤(Burkitt’s)細(xì)胞株Raji為研究對(duì)象,探討DSF/Cu能否在體外誘導(dǎo)Molt4和Raji細(xì)胞的凋亡,并進(jìn)一步從ROS、JNK、Nrf2以及NF—κB通路探討其潛在的分

8、子機(jī)制。
　　 研究方法
　　 1.細(xì)胞株:人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Molt4及人B細(xì)胞淋巴瘤(Burkjtt,s)細(xì)胞株Raji。
　　 2.MTT法評(píng)價(jià)濃度分別為0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和上述濃度DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理24小時(shí)對(duì)上述不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制增殖的作用和明確DSF和DSF/Cu對(duì)上述腫瘤細(xì)胞的IC50。
　　 3.
　　 1)Annexi

9、n V/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)0.125、0.25、0.5、1、2μ m/ml的DSF和上述濃度DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理Molt4細(xì)胞株24小時(shí)后凋亡細(xì)胞比例；
　　 2)Annexin V/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)0.5、1、2.5、5、7.5μ m/ml的DSF和上述濃度DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理Raji細(xì)胞24小時(shí)后凋亡細(xì)胞比例；
　　 4.Hoechst33342染色法觀察不同濃度DSF和DSF/

10、Cu處理兩種腫瘤細(xì)胞后的形態(tài)變化；
　　 5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)濃度分別為0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和上述濃度DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理Molt4細(xì)胞株8小時(shí)候細(xì)胞內(nèi)ROS水平:
　　 6.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)濃度為0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)以及DSF/Cu/NAC處理Molt4細(xì)胞株24小時(shí)后Nrf2基因的表達(dá),采用2-

11、Δct法對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行計(jì)算,分析Nrf2的表達(dá)量與各種不同處理組的關(guān)系。
　　 7.Western Blotting檢測(cè)0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和上述濃度DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理Molt4細(xì)胞株24小時(shí)以及Cu組(1μM)、DSF組(DSF:IC50-DSF/Cu)、DSF/Cu組(DSF:IC50-DSF/Cu,Cu:1μm)；DSF/Cu/NAC組(DSF:IC50-DSF/Cu,Cu

12、:1μm,NAC:10mM)五組作用24小時(shí)后Molt4細(xì)胞Bcl-2、JNK,磷酸化JNK(p-JNK)、Nrf2和p65蛋白表達(dá)變化。
　　 8.采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間均數(shù)的比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)方法；配對(duì)劑量資料的比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；多組間均數(shù)比較使用單因素方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì),在方差分析顯著的情況下使用Bonferroni(方差齊性)進(jìn)行多重比較；若方差不齊則采用近似F檢驗(yàn)(如Welch方法)

13、代替方差分析后采用Dunnett T3方法進(jìn)行多重比較；計(jì)量資料用x±s表示,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05,雙側(cè)檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果
　　 1.DSF單藥及DSF/Cu對(duì)兩種細(xì)胞株在體外均有明顯抑制增殖作用。MTT結(jié)果顯示:DSF單藥對(duì)Molt4和Raji細(xì)胞24小時(shí)的IC50值分別為:(IC50-Molt4-DsF=1.314±0.229μM/ml)、(IC50-Raji-DSF=5.064±2.268μM/ml)；DSF/C

14、u對(duì)Molt4和Raji細(xì)胞的IC50值分別為:(IC50-M0lt4-DSF/Cu=0.435±0.109μM/ml),(IC50-Raji-DSF/Cu=0.891±0.093μM/ml)。DSF/Cu對(duì)Molt4和Raji細(xì)胞的IC50顯著低于DSF單藥,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.993、P--0.004和t=0.610、P=0.033),提示Cu可顯著增強(qiáng)DSF對(duì)Molt4和Raji細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　 2.DS

15、F單藥及DSF/Cu對(duì)Molt4和Raji細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡作用。
　　 [1]Hoechst33342染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變:顯微鏡觀察不同濃度DSF和DSF/Cu對(duì)Molt4和aaji細(xì)胞處理24小時(shí)后,通過(guò)Hoechst33342染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變,結(jié)果發(fā)現(xiàn),Molt4細(xì)胞株經(jīng)低濃度的DSF(0.125、0.25、0.5μM)處理后細(xì)胞凋亡特征不明顯,而當(dāng)DSF濃度提高為(1、2μM)時(shí),細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、凝集

16、,并有凋亡小體,變現(xiàn)為明亮的顆粒狀藍(lán)染:而DSF/Cu組在低濃度組(0.125μM)就可見較典型的凋亡現(xiàn)象,但當(dāng)濃度提高為0.25μM后,凋亡現(xiàn)象更加明顯,且隨DSF/Cu濃度增加而增多。Raji細(xì)胞經(jīng)DSF和DSF/Cu處理后同樣出現(xiàn)與Molt4細(xì)胞相似的形態(tài)學(xué)變化。
　　 [2]Annexin V/PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡細(xì)胞比例:根據(jù)MTT和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和DSF聯(lián)

17、合Cu離子(1μM)處理Molt4細(xì)胞株24小時(shí)后觀察細(xì)胞凋亡比例變化。結(jié)果顯示,DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4濃度主效應(yīng)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=423.317,P=0.000)；DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4細(xì)胞處理方法主效應(yīng)差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=84.305,P=0.000)。提示隨著DSF或者DSF/Cu濃度增加,Molt4細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比例逐漸升高,凋亡比例表現(xiàn)劑量依賴性。進(jìn)一步應(yīng)用方差分析比較兩種不同處

18、理組細(xì)胞凋亡率的差異。對(duì)照組DSF、DSF/Cu的自然凋亡率分別為4.016％=1=0.930％、3.977％±0.609％。經(jīng)單因素方差分析,不同濃度的DSF或者DSF/Cu均可誘導(dǎo)Molt4細(xì)胞凋亡,與對(duì)照組相比均有顯著性差異(F=98.573、P=0.000:F=199.891、P=0.000)應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),同一濃度的DSF和DSF/Cu作用于Molt4細(xì)胞,其凋亡細(xì)胞比例存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-8.338,P=0.00

19、1；t=4.957,P=0.008；t=-24.034,P=0.001:t=-14.614,P=0.001；t=-14.52,P=0.000)。提示同一濃度的DSF/Cu比DSF更能有效誘導(dǎo)Molt4細(xì)胞凋亡。
　　 同樣,我們選取0.5、1、2.5、5、7.5μm/ml的DSF和DSF聯(lián)合Cu離子(1μM)處理Raji細(xì)胞24小時(shí)后觀察凋亡細(xì)胞比例；結(jié)果顯示,DSF和DSF/Cu分別作用于Raji細(xì)胞濃度主效應(yīng)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意

20、義(F=356.370,P=0.000):DSF和DSF/Cu分別作用于Raji細(xì)胞處理方法主效應(yīng)差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=419.434,P=0.000)。提示隨著DSF或者DSF/Cu濃度增加,Raji細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比例逐漸升高,凋亡比例表現(xiàn)劑量依賴性。應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)檢測(cè)同一濃度下,DSF和DSF/Cu處理Raji細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡比例是否存在差異。結(jié)果顯示DSF和DSF/Cu各濃度誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡比例相比,均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=

21、-12.277,P=0.000:t=-10.748,P=0.000；t=-9.014,P=0.001:t=-8.334,P=0.001:t=-11.321,P=0.000)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,我們認(rèn)為DSF和DSF/Cu對(duì)Raji細(xì)胞均存在誘導(dǎo)凋亡的能力,但DSF/Cu誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用明顯強(qiáng)于DSF。
　　 [3]Western blotting檢測(cè)抗凋亡蛋白表達(dá):我們選擇不同濃度的DSF(0.125、0.25、0.5、1、2μM

22、/ml)和以上濃度DSF聯(lián)合Cu1μM作用于Molt4細(xì)胞24小時(shí)后,以Western Blotting方法檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示:DSF/Cu組Molt4細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組受抑,且呈劑量依賴性。而DSF單藥組僅在很高濃度是才能下調(diào)Bel-2蛋白表達(dá)。
　　 3.DSF/Cu可提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)的ROS水平:我們選取0、0.125、0.25、0.5、1、2μm/ml的DSF和DSF聯(lián)合Cu離

23、子(1μM)處理Molt4細(xì)胞8小時(shí)后觀察凋亡細(xì)胞內(nèi)ROS水平變化；結(jié)果顯示,DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4細(xì)胞濃度主效應(yīng)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=123.070,P=0.000)；隨著DSF或者DSF/Cu濃度增加,Molt4細(xì)胞的ROS水平比例逐漸升高,DSF/Cu組升高更加明顯,ROS水平比例表現(xiàn)劑量依賴性。應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)檢測(cè)同一濃度下,DSF和DSF/Cu處理Molt4細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積是否存在差異。結(jié)果顯

24、示DSF和DSF/Cu各濃度誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡比例相比,均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-8.338,P=0.001；t=-4.957,P=0.008:t=-24.034,P=0.001；t=-14.614,P=0.001:t=-14.529,P=0.000)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,我們認(rèn)為DSF和DSF/Cu對(duì)Molt4細(xì)胞均存在誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積的能力,但DSF/Cu誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積的能力的作用明顯強(qiáng)于DSF。
　　 4.DSF/Cu可下

25、調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)水平:將不同濃度的DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4細(xì)胞24小時(shí)后,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4濃度主效應(yīng)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=34.909,P=0.000)；DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4細(xì)胞處理方法主效應(yīng)差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=159.371,P=0.000)。隨著DSF/Cu濃度增加,Molt4細(xì)胞的Nrf2表

26、達(dá)水平逐漸降低,呈劑量依賴性。進(jìn)一步分析比較兩種不同處理組細(xì)胞Nrf2表達(dá)水平的差異,應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)檢測(cè)同一濃度下,DSF和DSF/Cu處理Molt4細(xì)胞后Nrf2水平變化是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果顯示DSF和DSF/Cu各濃度誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Nrf2水平變化相比較,均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異0=3.263,P=0.031；t=11.668,P=0.000；t=11.563,P=0.000；t=10.612,P=0.000；t=13.142,P=0

27、.000)。結(jié)果表明DSF、DSF/Cu均可抑制細(xì)胞內(nèi)Nrt2的表達(dá),而DSF/Cu組對(duì)Nrf2的抑制效果更加明顯。
　　 5.DSF/Cu可上調(diào)JNK通路表達(dá),下調(diào)p65和Nrf2通路表達(dá):將不同濃度的DSF和DSF/Cu分別作用于Molt4細(xì)胞24小時(shí)后,Western blotting結(jié)果顯示兩處理組總JNK蛋白表達(dá)均無(wú)明顯變化,DSF/Cu組磷酸化JNK(p-JNK)表達(dá)隨DSF/Cu濃度增加而明顯上調(diào),而DSF單藥組p

28、-JNK表達(dá)沒有明顯變化。同樣以Western blotting方法檢測(cè)p65蛋白變化,結(jié)果顯示DSF單藥和DSF/Cu組隨藥物濃度增高,p65表達(dá)逐漸下調(diào),但DSF/Cu組p65表達(dá)下調(diào)程度顯著高于DSF單藥組。Western blotting方法檢測(cè)Nrf2蛋白表達(dá)顯示DSF組低濃度似乎可下調(diào)Nrf2表達(dá),但隨濃度增加這種作用反而不明顯,而DSF/Cu組隨藥物濃度增加,Nrf2表達(dá)逐漸下調(diào)。
　　 6.ROS抑制劑-NAC對(duì)

29、DSF/Cu誘導(dǎo)Molt4細(xì)胞凋亡的影響:應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察各濃度DSF/Cu及加入ROS抑制劑NAC后作用Molt4細(xì)胞24小時(shí)后細(xì)胞凋亡比例的變化。加入NAC后DSF/Cu誘導(dǎo)Molt4細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比例均出現(xiàn)不同程度下降,應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)顯示同一濃度下DSF/Cu和DSF/Cu/NAC兩種處理后凋亡細(xì)胞比例均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-1.719,P=0.161:t=5.090,P=0.007；t=-4.941,P=0.008；t=

30、4.814,P=0.009；t=4.870,P=0.008),DSF/Cu組凋亡細(xì)胞比例明顯高于DSF/Cu/NAC組。提示DSF/Cu誘導(dǎo)Molt4細(xì)胞的凋亡細(xì)胞比例可以被NAC所抑制。
　　 7.ROS是DSF/Cu調(diào)控JNK、p65以及Nrf2表達(dá)的關(guān)鍵:將不同濃度DSF/Cu以及DSF/Cu/NAC處理Molt4細(xì)胞24小時(shí)后,應(yīng)用熒光定量PCR的方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)水平。結(jié)果示加入NAC后DSF/Cu誘導(dǎo)Mol

31、t4細(xì)胞后Nrf2的表達(dá)水平均出現(xiàn)不同程度上升,應(yīng)用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)檢測(cè)同一濃度下,DSF/Cu與DSF/Cu/NAC兩種方法處理細(xì)胞24小時(shí)后觀察細(xì)胞內(nèi)Nrf2的表達(dá)水平差異。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示在低濃度組(0.125μM)兩種處理的Nrf2水平無(wú)差異,但從0.25μM起,DSF/Cu和DSF/Cu/NAC處理細(xì)胞后Nrf2的水平均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,DSF/Cu組的表達(dá)水平明顯低于DSF/Cu/NAC組(t=-2.622,P=0.059；t=-

32、3.473,P=0.026；t=-4.651,P=0.010；t=-5.245,P=0.006:t=-8.693,P=0.001)。提示NAC可抑制DSF/Cu對(duì)Nrf2的表達(dá)水平的下調(diào)能力。
　　 選擇Cu(1μM)、DSF(0.5μM)、DSF/Cu(DSF:0.5μM,Cu:1μM)以及DSF/Cu/NAC(DSF:0.5μM,Cu:1μM,NAC:10mM)作用于Molt4細(xì)胞24小時(shí)后,應(yīng)用Western Blotti

33、ng的方法,觀察細(xì)胞內(nèi)通路的變化。結(jié)果提示:Cu組、DSF組與空白對(duì)照組相比,p-JNK蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,DSF/Cu組p-JNK蛋白表達(dá)明顯增高,但可以被NAC所抑制。Cu組同空白對(duì)照組的p65表達(dá)無(wú)明顯變化,DSF組同DSF/Cu組的p65表達(dá)均較空白對(duì)照組明顯下調(diào),而DSF/Cu組p65表達(dá)下調(diào)更明顯,DSF/Cu對(duì)p65表達(dá)下調(diào)作用也可以被NAC抑制。同樣DSF/Cu組對(duì)Nrf2蛋白表達(dá)的下調(diào)作用也可被NAC所抑制。上述結(jié)果提

34、示DSF/Cu很可能通過(guò)ROS調(diào)控著JNK、p65和Nrf2的表達(dá)。
　　 結(jié)論
　　 1.DSF單藥對(duì)淋巴系腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用；但Cu可顯著提高其抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用。
　　 2.DSF單藥及DSF/Cu均可顯著提高M(jìn)olt4細(xì)胞內(nèi)ROS的水平,但DSF/Cu作用更加顯著。
　　 3.DSF/Cu能夠增加Molt4細(xì)胞內(nèi)磷酸化JNK(p—JNK)的表達(dá)水平,下調(diào)p65和Nrf