發(fā)育早期暴露低劑量雙酚A對(duì)青春期大鼠體重、糖代謝及脂聯(lián)素影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、前言:
　　 近年來(lái)，隨著社會(huì)的發(fā)展及生活條件的改善，兒童肥胖率呈持續(xù)上升趨勢(shì)，同西方社會(huì)一樣，肥胖已成為危害我國(guó)人口健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題。肥胖病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為肥胖的主要起因是熱量攝入過(guò)多、運(yùn)動(dòng)較少，導(dǎo)致過(guò)多能量轉(zhuǎn)變成脂肪組織。最近大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示:發(fā)育關(guān)鍵期暴露環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(environmental endocrine disrupters，EEDs)與日后肥胖發(fā)生有關(guān)，少數(shù)人群研究揭示機(jī)體

2、暴露EEDs能增加糖尿病和心腦血管疾病發(fā)生的危險(xiǎn)性。EEDs是存在于環(huán)境中的一大類外源性化學(xué)物質(zhì)，大多具有擬雌激素樣作用，能夠破壞機(jī)體內(nèi)環(huán)境的協(xié)調(diào)和穩(wěn)定。因此，有關(guān)EEDs對(duì)肥胖及健康的影響及相關(guān)機(jī)制的研究成為熱點(diǎn)之一。
　　 雙酚A(Bisphenol A，BPA)是一種重要的化工原料，是聚碳酸脂塑料和環(huán)氧樹(shù)脂生產(chǎn)的關(guān)鍵單體，廣泛用于塑料生產(chǎn)，如嬰兒奶瓶、食品和飲料罐的內(nèi)壁表層中，人體在正常情況下有廣泛的接觸機(jī)會(huì)。BPA是一種

3、EEDs，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌激素類似，具有弱的雌激素活性，系環(huán)境雌激素的一種。BPA能與雌激素競(jìng)爭(zhēng)雌激素受體(estrogen receptor, ER)(包括ERα和ERβ)，ER活化后進(jìn)入細(xì)胞核，與DNA上雌激素反應(yīng)元件相結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，使許多蛋白表達(dá)。BPA還可與胰腺β細(xì)胞質(zhì)膜上的非經(jīng)典膜雌激素受體(ncmER)結(jié)合。
　　 人群研究顯示，被調(diào)查者尿中BPA的濃度與肥胖、糖尿病的發(fā)生率存在正相關(guān)關(guān)系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了B

4、PA可以通過(guò)與機(jī)體內(nèi)雌激素受體結(jié)合的方式，干擾胰島β細(xì)胞的分泌功能，引起葡萄糖代謝紊亂。BPA可以由母體經(jīng)胎盤(pán)和乳汁傳遞給子代，擾亂子代的正常發(fā)育。目前，BPA的研究多集中在胚胎發(fā)育、神經(jīng)發(fā)育、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和腫瘤發(fā)生等方面，對(duì)糖代謝影響的研究比較少，而且BPA的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。為進(jìn)一步探討發(fā)育早期暴露BPA對(duì)青春期子代大鼠體重和糖代謝的影響及作用機(jī)制，本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)孕期和哺乳期母鼠采用自由飲水的方式暴露BPA，檢測(cè)

5、青春期不同性別大鼠體重、空腹血糖、胰島素、脂聯(lián)素水平和脂肪組織脂聯(lián)素基因表達(dá)水平，探討B(tài)PA對(duì)體重和糖代謝的影響及機(jī)制，為進(jìn)一步探討B(tài)PA與肥胖及糖尿病的關(guān)系及機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)，為有效防治肥胖開(kāi)辟一個(gè)新的思路。
　　 研究目的:
　　 通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討發(fā)育早期暴露低劑量BPA與肥胖、胰島素抵抗的關(guān)系及對(duì)脂聯(lián)素的影響，為進(jìn)一步探討肥胖和糖尿病的原因及機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 選擇清潔劑S

6、D大鼠45只，其中，雌性大鼠30只，體重200-250g;雄性大鼠15只，體重250-350g，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。雌雄SD大鼠分籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后。每日晚8時(shí)按雌:雄比例為2∶1合籠交配，次日清晨對(duì)雌性大鼠陰道涂片檢查精子，凡查到精子的雌性大鼠定為妊娠第0天(gestation day0，GD0)。將在2周內(nèi)妊娠的母鼠隨機(jī)分成2組，分別為對(duì)照組（含1％乙醇的水）和實(shí)驗(yàn)組(1 mg/L)，每組6只，單籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組大鼠從妊娠

7、第6天(GD6)至哺乳期結(jié)束（即仔鼠出生后第21天）采用自由飲水方式進(jìn)行染毒，每天記錄大鼠飲水量，并新配制相應(yīng)濃度的BPA溶液。斷乳后飲用正常水，繼續(xù)喂養(yǎng)30天。每周稱量并記錄子代大鼠體重，每天記錄攝食量和飲水量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)大鼠腹主動(dòng)脈采血，分離血清。取肝、腎和生殖器及生殖器周?chē)静⒎Q重。測(cè)定血清血糖、胰島素、脂聯(lián)素水平和脂肪組織脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1、BPA暴露對(duì)母鼠孕期和哺乳期體重增

8、量、攝食量和飲水量的影響
　　 在整個(gè)孕期期間，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組孕鼠的平均體重增量、平均攝食量和平均飲水量沒(méi)有明顯差異(P＞0.05）。在哺乳期，實(shí)驗(yàn)組母鼠的平均體重增量、平均攝食量和平均飲水量與對(duì)照組比較均沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。
　　 2、BPA暴露對(duì)哺乳期子代大鼠體重的影響
　　 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠出生體重增加（P＜0.05）;第7天和21天實(shí)驗(yàn)組子代雌性大鼠體重高于對(duì)照組(P＜0.05

9、)，但實(shí)驗(yàn)組子代雄性大鼠體重與對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異(P＞0.05）。
　　 3、BPA暴露對(duì)斷乳后子代大鼠體重的影響
　　 與對(duì)照組比較，斷乳后實(shí)驗(yàn)組子代大鼠體重均高于對(duì)照組，但實(shí)驗(yàn)組子代雄性大鼠在斷乳后第三周差異才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），因此，我們認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組子代雌性大鼠較子代雄性大鼠更敏感。
　　 4、BPA暴露對(duì)子代大鼠主要臟器系數(shù)及生殖器周?chē)鞠禂?shù)的影響
　　 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組子代雌性

10、大鼠的肝臟系數(shù)和生殖器周?chē)鞠禂?shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），而腎臟系數(shù)和生殖器系數(shù)（子宮+卵巢）沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）;與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組子代雄性大鼠肝臟系數(shù)和腎臟系數(shù)均高于對(duì)照組，生殖器周?chē)鞠禂?shù)均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而生殖器系數(shù)（睪丸+附睪）沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。
　　 5、BPA暴露對(duì)子代大鼠空腹血糖、胰島素和血清ADP水平的影響
　　 與對(duì)照組比較，實(shí)

11、驗(yàn)組子代雌性大鼠空腹血糖、胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組子代雄性大鼠空腹血糖、胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)與對(duì)照組比較均沒(méi)有明顯差異(P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)組子代大鼠血清ADP水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6、BPA暴露對(duì)子代大鼠生殖器周?chē)窘M織ADP mRNA表達(dá)水平的影響
　　 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組子代雌性和雄性大鼠生殖器周?chē)窘M織ADP mRN

12、A表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、發(fā)育早期暴露低劑量雙酚A對(duì)青春期大鼠體重影響有性別差異;雙酚A使子代雌性大鼠出生體重明顯增加，并一直持續(xù)至青春期;使子代雄性大鼠體重從斷乳后第三周開(kāi)始明顯增加。
　　 2、發(fā)育早期暴露低劑量雙酚A可引起青春期雌性大鼠糖代謝紊亂，出現(xiàn)胰島素抵抗現(xiàn)象，對(duì)雄性大鼠沒(méi)有明顯影響。
　　 3、發(fā)育早期暴露低劑量雙酚A可明顯使青春期大鼠血清