HDAC11對脂多糖處理的Kupffer細胞免疫耐受誘導功能的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：組蛋白去乙酰化酶11(Histone deacetylase11,HDAC11)與細胞分裂周期,神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育,腫瘤的發(fā)生以及免疫功能調節(jié)等有著緊密聯(lián)系。最新研究表明,抑制單核巨噬細胞RAW264.7中HDAC11活性可促進該細胞內源性白介素10(interleukin10,IL-10)的表達,從而誘導免疫耐受的產(chǎn)生。本實驗旨在通過觀察抑制脂多糖處理的Kupffer細胞(KCs)中HDAC11活性對其內源性IL-10的表達和細胞表面

2、抗原遞呈相關分子表達的影響,探討抑制HDAC11誘導KCs免疫耐受產(chǎn)生的機制。
　　 方法：將BALB/c小鼠KCs經(jīng)密度梯度離心法分離,貼壁細胞用含20％胎牛血清(FCS)的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后隨機分為三組:(1)空白對照組(空白組,繼續(xù)以RPMI1640培養(yǎng)20h),(2)陰性對照組(陰性組,轉染空白質粒control vector),(3)質粒組(轉染HDAC11短發(fā)卡RNA質粒(HDAC11-shRNA))

3、,三組均給予脂多糖。3h后,以Real time-PCR和Western-blot法檢測各組KCs中HDAC11和IL-10基因及蛋白表達;流式細胞儀檢測KCs表面分子MHC-Ⅱ,B7-1,B7-2和CD40表達;將可識別卵清蛋白(ovalbumin,OVA)的轉基因小鼠脾T細胞與上述三組KCs共培養(yǎng),3d后3H-TdR標記法檢測T細胞增殖情況;以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測共培養(yǎng)上清液中IL-2含量。
　　 結果：⑴Rea

4、l-time PCR結果:以HDAC11及IL-10的2-△Ct值作為其表達量,以此值與GAPDH比值的-X±S代表其基因相對表達水平。HDAC11在質粒組表達最低,為0.076±0.007,與兩對照組相比(空白組0.145±0.012,陰性組0.141±0.013),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而IL-10在質粒組表達最高,為0.084±0.006,與兩對照組相比(空白組0.051±0.004,陰性組0.052±0.004),

5、差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。⑵)Western-blot結果:以HDAC11及IL-10條帶與GAPDH灰度值比值的-X±S代表其蛋白相對表達水平。與Real-time PCR結果相似,HDAC11在質粒組表達最低,為0.132±0.012,與兩對照組相比(空白組0.373＋0.023,陰性組0.365±0.019),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而IL-10在質粒表達最高,為0.218±0.018,與兩對照組相比(空白組

6、0.096±0.009,陰性組0.101±0.011),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。⑶流式細胞儀檢測結果:質粒組KC表面抗原遞呈相關分子表達低于空白對照組和陰性對照組。⑷共培養(yǎng)T細胞增殖結果:質粒組CPM值最低,為2163±146,與兩對照組相比(空白組3654±165,陰性組3509±142),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。⑸ELISA結果:質粒組共培養(yǎng)上清液中IL-2含量最低,為463.7±38.9 pg/mL,與兩對

7、照組相比(空白組879.2±65.5 pg/mL,陰性組854.4±67.3 pg/mL),差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。上述數(shù)據(jù)中,兩對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：抑制KCs內HDAC11表達可促進其內源性IL-10的過量表達,從而進一步抑制KCs抗原遞呈能力和共培養(yǎng)的T細胞增殖活化,誘導免疫耐受的產(chǎn)生。因此,HDAC11可能在肝臟這一免疫特惠器官中發(fā)揮重要作用,為后期應用HDAC11治療晚期肝