潰瘍性結腸炎小鼠結腸黏膜Flt3和Flt3L表達的研究.pdf

1、目的:潰瘍性結腸炎(UlcerativeColitis，UC)是炎癥性腸病(InflammatoryBowelDisease，IBD)的一種，該疾病主要侵及黏膜層和黏膜下層，其病因尚不十分清楚。近年來，腸黏膜中的樹突狀細胞(dendriticcell，DC)和調節(jié)性T細胞(regulatoryTcell，Treg)的作用是學者們研究的熱點?，F(xiàn)有的觀點認為DC和Treg之間的免疫調節(jié)在潰瘍性結腸炎的炎癥反應過程中起重要作用，并認為Fms樣

2、絡氨酸激酶3(Fms-liketyrosinekinase3，F(xiàn)lt3)及其配體（Flt3ligand，F(xiàn)lt3L）參與了UC炎癥反應過程中DC和Treg之間的調節(jié)。因此本研究采用小鼠潰瘍性結腸炎模型，觀察小鼠潰瘍性結腸炎模型組與正常組小鼠的一般狀態(tài)、疾病活動指數(shù)、光鏡下觀察HE染色病理變化和結腸黏膜損傷情況，并從細胞水平檢測小鼠結腸黏膜DC和Treg的表達，從基因水平和蛋白水平檢測Flt3和Flt3L的表達，探討DC和Treg及相關因

3、子Flt3和Flt3L在潰瘍性結腸炎發(fā)生、發(fā)展中所起的作用，為臨床UC的治療打下理論基礎。
　　 方法:采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)自飲法建立動物模型，BALB/c雄性小鼠20只，體重約25g，隨機分為2組，每組10只。正常組:予飲用蒸餾水;模型組:予自飲50g/LDSS溶液7天，觀察小鼠的一般狀態(tài)、記錄疾病活動指數(shù)(diseaseactivityindex，DAI)，并于造模后第7天處死小鼠，記錄結腸黏膜損傷指數(shù)(colonic

4、mucosadamageindex，CDMI)，光鏡下觀察HE染色小鼠結腸黏膜病理學改變，流式細胞學技術檢測小鼠結腸黏膜DC、Treg在細胞水平的表達變化，免疫組織化學染色方法檢測小鼠結腸黏膜Flt3在蛋白水平的表達變化，ELISA方法檢測小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達變化，實時熒光定量PCR(Real-TimePCR)方法檢測小鼠結腸黏膜Flt3/Flt3L在基因水平的表達變化。
　　 結果:
　　 1.模型組小

5、鼠DAI評分3.15±0.28、CMDI評分2.44±0.24與正常組DAI評分0.00±0.00、CMDI評分0.00±0.00比較均明顯升高，差異性顯著(P＜0.05)，提示小鼠潰瘍性結腸炎模型成功。
　　 2.模型組小鼠結腸黏膜中DC占細胞百分率0.19±0.18％、Treg占CD4+T的百分率4.11±2.14％與正常組小鼠結腸黏膜中DC占細胞百分率2.83±1.52％、Treg占CD4+T的百分率14.02±1.73％

6、比較均明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.模型組小鼠結腸黏膜中Flt3在蛋白水平上的表達量82.19±5.34較正常組Flt3的表達量31.66±2.31明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4.模型組小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達量為36.25±6.34pg/ml較正常組Flt3L表達量57.24±5.97pg/ml明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 5.模型組小鼠結

7、腸黏膜中Flt3mRNA的表達量0.53±0.06、Flt3LmRNA的表達量0.10±0.18較正常組Flt3mRNA的表達量1.01±0.13、Flt3LmRNA的表達量1.01±0.25比較均明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 在DSS誘導的小鼠潰瘍性結腸炎模型中DC和Treg之間存在免疫調節(jié)失衡，而導致該失衡的原因是Flt3和Flt3L在DC和Treg之間所發(fā)揮的橋梁作用受損，最終導致潰