大菱鲆與生長、耐高溫性狀相關的微衛(wèi)星標記篩選及微衛(wèi)星標記的開發(fā)研究.pdf

1、大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）是我國重要的海水養(yǎng)殖魚類，具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值。近年來，大菱鲆的種質(zhì)退化現(xiàn)象較為嚴重。為保證我國大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的健康、穩(wěn)定、可持續(xù)發(fā)展，目前已開始對其進行遺傳改良。本文中系統(tǒng)闡述了國內(nèi)外鲆鰈魚類育種的研究進展。根據(jù)當前國際上魚類遺傳育種的研究趨勢，認為采用選擇育種與分子遺傳標記技術相結合的方法對其進行遺傳改良，可望提高育種成效。因此，本研究以大菱鲆為材料，篩選了與生長、耐高溫

2、性狀相關的微衛(wèi)星標記，并進行了大菱鲆微衛(wèi)星標記的開發(fā)研究。 主要結果如下： 為了揭示出一些影響魚類生長發(fā)育速度方面的遺傳信息，本文利用分群分離分析法，以同一批受精卵孵化的同池養(yǎng)殖大菱鲆（Scophthalmus maximus L．）生長性狀發(fā)生分離的群體為材料，進行微衛(wèi)星DNA遺傳分析。30個多態(tài)性微衛(wèi)星位點對生長高值組（F組）和生長低值組（S組）各10個樣本建立的DNA混合池進行擴增時，在兩池間出現(xiàn)了7個差異片段。通

3、過對兩組大菱鲆個體PCR擴增出的差異條帶進行統(tǒng)計，分析微衛(wèi)星位點與大菱鲆生長性狀的相關性。結果表明，有1個微衛(wèi)星位點SmaC10在355bp的等位基因片段與大菱鲆生長性狀存在一定的負相關性；有4個微衛(wèi)星位點SmaC02、SmaC06、SmaC09、B11-I12/6/3分別在258bp、182bp、226bp、175bp的等位基因片段與大菱鲆生長性狀存在正相關性，其中位點Smac09在226bp的等位基因片段與生長性狀的正相關性極顯著，

4、相關系數(shù)達到0．354（P<0．01）。微衛(wèi)星位點SmaC09所擴增出的等位基因片段可作為具有良好生長特性人工選育群體的分子標記指導大菱鲆的輔助育種。 采用微衛(wèi)星分子標記技術分析大菱鲆耐高溫相關特性，為大菱鲆的分子輔助育種提供合適的分子標記。大菱鲆經(jīng)過耐高溫實驗處理，將其區(qū)分為耐高溫組與不耐高溫組，用于實驗分析。采用Salah．M（1997）的方法提取大菱鲆肌肉組織的DNA，進行微衛(wèi)星引物PCR（SSR-PCR）擴增，所用引物為

5、已知的30個大菱鲆微衛(wèi)星位點的側翼保守序列。對PCR擴增出的差異條帶進行個體統(tǒng)計，最后進行微衛(wèi)星位點與耐高溫性狀的相關性分析。結果表明，有1個微衛(wèi)星位點Sma-USC25478bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在一定的負相關性；有3個微衛(wèi)星位點Sma-USC24、Sma-USC27、Sma-USC31分別在106bp、286bp、135bp的等位基因片段與大菱鲆耐高溫性狀存在正相關性，其中位點Sma-USC27286bp的等位基因片

6、段與耐高溫性狀的正相關性極顯著，相關系數(shù)達到0．383（P<0．01），其余3個位點為一般顯著性相關。微衛(wèi)星位點Sma-USC27所擴增出的差異等位基因片段可作為分子標記指導耐熱大菱鲆的輔助育種。 利用FIASCO的方法構建了大菱鲆以（GT）。為主的微衛(wèi)星DNA富集文庫，檢測結果證明該微衛(wèi)星DNA文庫的富集效率在43％左右。測序得到88條含有微衛(wèi)星DNA的序列的克隆，共得到91個微衛(wèi)星DNA位點。在這些微衛(wèi)星DNA位點中，除（C