同軸靜電紡絲法制備載雙營養(yǎng)因子活性神經(jīng)組織工程支架.pdf

1、基于組織工程支架、種子細胞和生長因子三大要素，從仿生細胞外基質(zhì)的角度，研究和開發(fā)生物活性替代物，用于創(chuàng)傷組織修復以及組織再生，是組織工程領域長久的任務和挑戰(zhàn)。外周神經(jīng)損傷是臨床上的常見疾患，主要由事故造成的創(chuàng)傷引起。目前修復神經(jīng)斷裂和缺損的手術通常是直接縫合和使用了病人其他部位相對不重要的神經(jīng)來替代，具有一定的局限性。神經(jīng)支架復合神經(jīng)營養(yǎng)因子和種子細胞為長距離神經(jīng)缺損修復帶來新的希望，然而普通的“物理吸附”復合神經(jīng)營養(yǎng)因子的方法效果并不

2、理想，因此，制備一種負載營養(yǎng)因子、提高營養(yǎng)因子緩釋性能并能保護其生物活性的神經(jīng)支架至關重要。
　　本研究中，我們采用同軸靜電紡絲技術制備出同時負載單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）和神經(jīng)生長因子（NGF）雙神經(jīng)營養(yǎng)因子并保持它們部分活性的納米纖維支架，同時采用高速旋轉滾筒接收裝置使該活性支架具有取向結構，這一結構與正常神經(jīng)基底膜結構相似。這種靜電紡納米纖維支架比表面積大，孔隙率高，纖維按一定方向排列，且具有活性神經(jīng)營養(yǎng)因子。掃描電

3、子顯微鏡（SEM）和透射電子顯微鏡（TEM）分別表征得到這種靜電紡納米纖維具有很好的取向度，纖維有連續(xù)的“芯-殼”結構，絲素蛋白(SF)/聚乳酸己內(nèi)酯(PLCL)殼層相和GM1/NGF芯層相之間有明顯的分界面。接觸角測試顯示絲素蛋白的加入提高了該支架的親水性能，此外，力學測試結果證明該支架在平行于纖維方向上具備良好的力學性能。
　　神經(jīng)營養(yǎng)因子體外釋放實驗研究通過在一定的時間點用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測，得出緩釋液濃度，計算出緩釋量

4、和累積緩釋量后作出體外釋放行為曲線圖。釋放行為曲線圖分析表明，無論是單獨負載還是共同負載，GM1和NGF均能在一開始的突釋階段后以持續(xù)穩(wěn)定的方式釋放到環(huán)境介質(zhì)中。隨后我們大鼠腎上腺嗜鎘瘤細胞（PC12未分化）培養(yǎng)形態(tài)對比實驗檢測出釋放后的NGF依然保持一定活性，用大鼠雪旺細胞（SCs）細胞增殖實驗檢測出釋放后的GM1也具有一定的活性。
　　體外生物相容性測試以SCs和PC12（未分化）作為種子細胞。MTT結果表明，負載雙營養(yǎng)因子靜