沙門氏菌LAMP檢測方法的建立.pdf

1、當今，全球經(jīng)濟快速發(fā)展，人們的物質生活逐漸提高，動物源性食品的消費量也隨之增加，隨之而來的，是步入人們的視野，愈發(fā)受到人們關注的由動物源性食品引發(fā)的食品安全問題。根據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)絡顯示的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，食源性致病菌是食源性疾病的主要原因之一。動物源性食品中，細菌性食物中毒是最常見的，并且由于沙門氏菌中毒引起的，在全世界范圍內食物中毒的病例中，是居于前列的。
　　目前，對沙門氏菌的生化實驗檢測和血清學鑒定等傳統(tǒng)檢測方法，需要較長的

2、實驗周期，試劑多而且雜，在快速、特異檢測方面具有一定的局限性，而各種 PCR檢測方法敏感、快速，卻需昂貴龐大的儀器設備、復雜繁瑣的電泳過程等，進而使PCR檢測在受到條件限制的檢驗工作中，很難得到普遍應用。
　　環(huán)介導等溫擴增是Notomi等在2000年發(fā)明的一種新穎的恒溫核酸擴增技術，此技術克服了傳統(tǒng)檢測方法的繁瑣以及PCR檢測方法的局限性，具有多方面的優(yōu)點，費用低、反應快的優(yōu)點適合應用于高通量檢測大量樣品，易操作、結果可直接觀察

3、的優(yōu)點便于進行現(xiàn)場快速檢測，在診斷疾病以及檢測食品安全等方面的前景極其廣闊。
　　本試驗根據(jù)GenBank公布的沙門氏菌高度保守的腸毒素基因序列設計特異性引物，繼而將LAMP反應體系中的反應時間、反應溫度、Mg2+濃度、內外引物濃度比進行優(yōu)化，并且進行一系列的特異性、敏感性、穩(wěn)定性試驗，并將LAMP與常規(guī)PCR進行比較，以此來建立最適宜的環(huán)介導恒溫核酸擴增體系，實現(xiàn)對沙門氏菌的特異性檢測。
　　結果顯示：LAMP方法對沙門氏