沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠骨質疏松癥治療作用的機理探討.pdf

1、目的
　　 探討具有溫補腎陽作用的單味中藥.沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢所致大鼠骨質疏松癥的治療作用,并從破骨細胞分化調控因子、與骨代謝密切相關的激素和細胞因子等角度,揭示它們治療的作用機理以及作用特點,為中醫(yī)藥防治骨質疏松癥提供進一步實驗依據。
　　 方法
　　 選用雌性Wistar大鼠94只,隨機分為3組:空白對照組12只,假手術組12只,造模組70只。在術后1個月,將造模組大鼠隨機分為6組,即模型組

2、、陽性對照組、沙苑子組和狗脊組,每組各12只,肉蓯蓉組和韭菜子組,每組各11只。然后,開始灌胃給藥:各中藥組給予濃度為1g生藥／mL的水煎劑,給藥體積為5.6mL／kg體重,即給藥劑量均為5.6g生藥／kg體重；陽性對照組給予0.008mg／mL的己烯雌酚,給藥體積為5.6mL／kg體重,即給藥劑量為0.0448mg／kg體重。以上給藥1d1次,連續(xù)6d,休息1d后,如此給藥3個月?？瞻讓φ战M、假手術組、模型組按同法灌服等體積的蒸餾水。

3、
　　 各組大鼠于處死前15d和前3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg／kg體重,對骨進行熒光標記。給藥結束后,將大鼠以45mg／kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股動脈取血,用于檢測外周血清中IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH的含量。然后,將各組大鼠處死,取右側脛骨制作不脫鈣骨切片,用于骨組織形態(tài)計量學指標的檢測；取左側脛骨制作冰凍切片,用于成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKL蛋白及其mRNA表達的檢測。
　　

4、 統(tǒng)計學處理方法:實驗結果皆以均數(shù)±標準差(x±s)表示,采用單因素方差分析(ANOVA)進行處理,組間兩兩比較,采用q檢驗。
　　 結果
　　 1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨骨組織形態(tài)計量學指標的影響
　　 1.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨TBV％的影響
　　 模型組大鼠脛骨TBV％較假手術組明顯降低。與模型組比較,沙苑子組、狗脊組和陽性對照組的大鼠脛骨TBV％顯著增加

5、；而肉蓯蓉組和韭菜子組則無顯著性差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TBV％明顯低于假手術組；沙苑子組、陽性對照組較假手術組則無顯著性差異。見表1。
　　 1.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨TRS％的影響
　　 與假手術組相比,模型組大鼠脛骨TRS％明顯增高。沙苑子組、狗脊組和陽性對照組較模型組大鼠脛骨TRS％明顯降低；肉蓯蓉組和韭菜子組較模型組無顯著性變化。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TRS％

6、較假手術組顯著增高；沙苑子組和陽性對照組較假手術組則無顯著性差異。見表2。
　　 1.3沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨TFS％和MAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR均明顯高于假手術組。與模型組相比,沙苑子組和陽性對照組大鼠脛骨TFS％和MAR顯著降低；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性差異。與假手術組相比,沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TFS％均顯著增高；陽性對照組無明顯差異。狗

7、脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨MAR高于假手術組；沙苑子組和陽性對照組則無明顯差異。見表3。
　　 1.4沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨mAR和OSW的影響
　　 與假手術組相比,模型組大鼠脛骨mAR顯著升高。與模型組相比,沙苑子組和陽性對照組大鼠脛骨mAR明顯降低；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無明顯差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨mAR明顯高于假手術組；沙苑子組和陽性對照組較假手術組無顯著性差異。

8、
　　 模型組大鼠脛骨OSW較假手術組明顯升高。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨OSW較模型組和假手術組均無顯著性差異。陽性對照組大鼠脛骨OSW低于模型組,與假手術組無顯著性差異。見表4。
　　 2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKL蛋白及其mRNA表達的影響
　　 2.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANK

9、L蛋白表達的影響
　　 2.1.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG蛋白表達的影響
　　 與假手術組相比,模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG蛋白表達均明顯下調。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組和陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG蛋白表達明顯上調；肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組較假手術組明顯下調；沙苑予組和陽性對照組與假手術組相比,無明顯差異

10、。見表5。
　　 2.1.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達的影響
　　 模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達明顯高于假手術組。沙苑子組、陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達較模型組顯著下調；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性變化。與假手術組相比,狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨成骨細胞RANKL蛋白表達上調；沙苑子組、狗脊組、

11、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨骨髓基質細胞RANKL蛋白表達上調；沙苑子組大鼠脛骨成骨細胞RANKL蛋白表達較假手術組無顯著性差異。陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKL蛋白表達與假手術相比,均無明顯差異。見表6。
　　 2.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKLmRNA表達的影響
　　 2.2.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞O

12、PGmRNA表達的影響
　　 與假手術組相比,模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPGmRNA表達均明顯下調。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組和陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞OPGmRNA表達明顯上調；肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組較假手術組明顯下調；沙苑子組和陽性對照組與假手術組相比,無明顯差異。見表7。
　　 2.2.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質

13、細胞RANKLmRNA表達的影響
　　 模型組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKLmRNA表達明顯高于假手術組。沙苑子組以及陽性對照組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKLmRNA較模型組顯著下調；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性變化。與假手術組相比,狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨成骨細胞和骨髓基質細胞RANKLmRNA表達上調；沙苑子組、陽性對照組無明顯差異。見表8。
　　 3沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對

14、去卵巢大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量的影響
　　 與假手術組相比,模型組大鼠外周血清中IL-1含量顯著增高。與模型組相比,沙苑子組及陽性對照組大鼠外周血清中IL-1含量明顯降低；其它各給藥組則無顯著性變化。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中IL-1含量較假手術組均顯著升高；陽性對照組無明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中IL-6含量高于假手術組。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組及陽性對照組大鼠外周

15、血清中IL-6含量較模型組明顯降低；肉蓯蓉組和韭菜子組則無顯著性差異。與假手術組相比,狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中IL-6含量明顯增高；沙苑子組和陽性對照組無明顯差異。見表9。
　　 4沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對去卵巢大鼠外周血清中BGP、CT和PTH含量的影響
　　 模型組大鼠外周血清中BGP含量較假手術組明顯增高。沙苑子組和陽性對照組大鼠外周血清中BGP含量顯著低于模型組；其余各給藥組較模型組無顯著

16、性的變化。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組較假手術組均顯著升高；陽性對照組無明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中CT含量較假手術組明顯降低。與模型組相比,沙苑子組及陽性對照組CT含量明顯增加；其余各組藥組則無顯著性變化。與假手術組相比,狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中CT含量顯著降低；沙苑子組和陽性對照組無明顯差異。
　　 與假手術組相比,模型組及各給藥組大鼠外周血清中PTH含量均無顯著性變化；各給藥組

17、大鼠外周血清中PTH含量較模型組亦無顯著性變化。見表10。
　　 假手術組與空白對照組相比,以上各項指標均未發(fā)生顯著性變化,從而排除了手術本身對實驗的影響。
　　 結論
　　 沙苑子和狗脊能在一定程度上使去卵巢所致的大鼠高轉換型骨質疏松癥恢復到一種骨形成大于骨吸收的相對平衡的狀態(tài),從而防止骨量的丟失,達到治療作用；而肉蓯蓉、韭菜子則無明顯的治療作用。沙苑子和狗脊的具體作用環(huán)節(jié)和作用特點如下:
　　 (1)