水產(chǎn)品源創(chuàng)傷弧菌的毒性及超高壓處理對(duì)其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和毒性的影響.pdf

1、本文通過(guò)溶血實(shí)驗(yàn)和小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)市售水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌和創(chuàng)傷弧菌CICC21615菌株(V.vulnificus CICC21615)毒性大小。從市售水產(chǎn)品中分離獲得的6株疑似創(chuàng)傷弧菌菌株經(jīng)生化鑒定和溶細(xì)胞素基因擴(kuò)增、基因測(cè)序后證實(shí)除2號(hào)分離菌株基因測(cè)序未測(cè)出外，其它5株確定為創(chuàng)傷弧菌。V.vulnificus CICC21615擴(kuò)增出400 bp左右的基因條帶，而6株分離株均擴(kuò)增出222 bp左右的典型創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素基因條帶。

2、在溶血實(shí)驗(yàn)中，V.vulnificus CICC21615的溶血圈與菌落直徑之比達(dá)到3.0，1-6號(hào)分離株分別為2.3、2.0、2.8、2.0、2.5和2.1。在小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)中，V.vulnificus CICC21615的半致死量(LD50)是3.776×107CFU/mL;而3號(hào)分離株的LD50為2.218×108CFU/mL。結(jié)果表明V.vulnificus CICC21615菌株毒性較3號(hào)分離株略強(qiáng);3號(hào)菌株命名為V.vul

3、nificus cd03。
　　研究了市售水產(chǎn)品中分離獲得的V.vulnificus cd03與V.vulnificusCICC21615毒性大小和小鼠臟器毒性反應(yīng)差異。兩菌株分別稀釋到106 CFU/mL、107 CFU/mL和108 CFU/mL，按照0.02 mL菌液/g體重給小鼠腹腔注射。小鼠腹腔注射24 h后，V.vulnificus CICC21615與V.vulnificus cd03108 CFU/mL劑量組肝臟系

4、數(shù)分別達(dá)到了7.30％和7.27％，分別高于同菌株107 CFU/mL、106 CFU/mL劑量組和對(duì)照組，差異顯著。兩株創(chuàng)傷弧菌108 CFU/mL劑量組的小鼠肝臟細(xì)胞空泡變性明顯，內(nèi)部結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞膜破裂。脾臟組織在108 CFU/mL劑量組中細(xì)胞間隙增大，出現(xiàn)大量白色斑點(diǎn)，脾臟組織疏松明顯。V.vulnificus CICC21615與V.vulnificus cd03108 CFU/mL劑量組谷草(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT

5、)酶活增加量、谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶(GST)酶活減少量分別最高達(dá)到16.62與11.62、5.77與5.6、46.25與37.29，差異顯著，所有劑量組丙二醛(MDA)含量變化不顯著。感染小鼠體內(nèi)，創(chuàng)傷弧菌主要分布在肝臟和脾臟，少量分布在腎臟，血液中未分離出單菌落。試驗(yàn)結(jié)果表明，V.vulnificus CICC21615的臟器毒性要強(qiáng)于V.vulnificus cd03。菌液對(duì)小鼠肝臟和脾臟的損傷程度隨著菌液濃度的增加而加重，并且高濃度

6、的菌液既能加速小鼠肝臟組織的損傷程度，同時(shí)也提高了細(xì)胞自身修復(fù)的速度，可能原因在于激活并加快了細(xì)胞內(nèi)部相關(guān)損傷修復(fù)反應(yīng)。
　　本文通過(guò)超高壓處理實(shí)驗(yàn)，研究了超高壓對(duì)水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與毒性的影響。創(chuàng)傷弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(V.vulnificusulnificusCICC21615)和分離自水產(chǎn)品中的創(chuàng)傷弧菌（V.vulnificusulnificus Cd03)經(jīng)100、150、200、250、300 MPa壓力處理進(jìn)行菌存活

7、數(shù)計(jì)數(shù)、透射電鏡觀察、260 nm與280nm紫外吸收物測(cè)定、溶血試驗(yàn)和小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，未處理組作為對(duì)照組。V.vulnificusulnificus CICC21615在200 MPa壓力處理下，只存活5個(gè)，致死率接近100％，250 MPa及以上致死率100％，V.vulnificusulnificus Cd03在200 MPa及以上壓力處理致死率為100％。對(duì)照組的創(chuàng)傷弧菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整，胞漿分布均勻有序。隨著壓力的升高，細(xì)胞壁

8、皺縮明顯，同時(shí)細(xì)胞膜有明顯的損傷且局部破裂，內(nèi)含物泄漏、出現(xiàn)較大面積的透電子區(qū)。200 MPa及以上壓力處理的菌株，細(xì)胞膜消失，細(xì)胞擬核聚合，細(xì)菌細(xì)胞蛋白凝聚。在260 nm紫外吸收中，V.vulnificusulnificus CICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03分別在250 MPa和200MPa達(dá)到最高點(diǎn)，分別達(dá)到0.105和0.119;而在280nm紫外吸收中，V.vulnificusulnif

9、icusCICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03均在250MPa達(dá)到最高點(diǎn)，分別達(dá)到0.106和0.187。隨著壓力的升高，V.vulnificusulnificus CICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03的溶血活性和急性毒性不斷減小，兩者溶血活性在200MPa及以上降為0，兩者急性毒性在150MPa及其以上均對(duì)小鼠無(wú)致死作用。V.vulnificusulnificus