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文檔簡介
1、上海高科聯(lián)合生物技術有限公司設計合成的抗菌肽GK8具有良好的殺菌活性,前期已人工合成了一定量的純品,同時對GK系列抗菌肽也進行了大腸桿菌的融合表達。這為本文開展GK8畢赤酵母表達系統(tǒng)的研究創(chuàng)造了條件。選用的巴氏畢赤酵母不但具有原核生物易培養(yǎng)、操作便利等特點,又具有真核生物蛋白翻譯后加工的能力;同時具有高表達、高穩(wěn)定和高分泌等優(yōu)點。其表達質粒屬于分泌型,便于提取和純化。
本研究在由上海生工生物工程有限公司訂購的質粒pUC57
2、-GK8和設計的引物P1、P2的基礎上,以pUC57-GK8質粒DNA為模板,通過PCR擴增鑒定該質粒的可靠性。將含有pUC57-GK8質粒大腸桿菌DH5α進行大量表達。經(jīng)質粒提取、酶切鑒定篩選出陽性克隆用于構建重組質粒pPIC9K-GK8。重組質粒pPIC9K-GK8電轉化到畢赤酵母中,通過G418篩選和雙酶切鑒定選擇轉化了pPIC9K-GK8的畢赤酵母菌株進行誘導表達,收集畢赤酵母分泌表達的目標產(chǎn)物GK8。通過SDS-PAGE電泳和
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