應用多重PCR及實時熒光PCR方法鑒別食品中肉類成分.pdf

1、肉與肉制品摻假是食品質(zhì)量控制面臨的重要挑戰(zhàn)。食品中肉類成分的鑒別與分析技術已逐步形成了以核酸檢測為基礎的方法體系，其鑒別精度可達屬與亞屬水平。本研究主要利用多重PCR技術鑒別市場上常見的豬肉、牛肉、雞肉、羊肉，另外，本研究還建立了添加有擴增內(nèi)標的食品中豬肉和雞肉成分的實時熒光PCR檢測方法。具體研究和結果如下:
　　1.建立快速可靠的用于食品中4種肉類成分（雞、牛、羊、豬）快速鑒別的通用引物多重PCR(Universalprime

2、rs-multiplexPCR，UP-M-PCR)方法?；趧游锞€粒體細胞色素b基因的差異性位點，設計兩組各5條長度不同的多重PCR引物，建立并優(yōu)化多重PCR反應體系，通過電泳檢測擴增產(chǎn)物分子量差異實現(xiàn)4種肉類的快速鑒別;應用優(yōu)化的多重PCR方法對80份市售食品樣本進行盲樣檢測，驗證鑒別方法的準確性。結果顯示，在優(yōu)化的反應條件下，選擇特異性高、序列較長的多重PCR引物可有效地進行食品中豬、牛、羊、雞源性成分的快速鑒定，檢測靈敏度達到皮克

3、級DNA;對市售食品樣本的鑒別驗證了方法的實用價值。該方法精確穩(wěn)定，可用于食品中多種動物源性成分的快速鑒別。
　　2.建立含有擴增內(nèi)標(IAC，Internalamplificationcontrol)的用于食品中豬肉和雞肉成分鑒別的Taqman探針實時熒光PCR檢測方法。分別基于豬的betaactin基因和雞的transforminggrowthfactor基因設計引物和探針;考察引物和探針的特異性與靈敏度;設計并構建擴增內(nèi)標，

4、優(yōu)化體系中擴增內(nèi)標濃度，建立內(nèi)標實時熒光PCR體系;使用該檢測體系對生肉和熟肉來源的DNA模板進行檢測評價;應用該體系對市售38份樣本進行盲樣檢測。結果顯示，含有擴增內(nèi)標的Taqman探針實時熒光PCR體系能有效地進行食品中豬肉和雞肉成分的快速檢測，非目標物種在40個循環(huán)內(nèi)均無出現(xiàn)擴增，檢出限均為0.5ngDNA;該體系對生肉和熟肉來源的DNA模板檢測無顯著差異;對市售食品樣本的鑒別驗證了方法的實用價值。因此，該方法準確穩(wěn)定，可用于食品