胚胎干細(xì)胞修復(fù)受損子宮內(nèi)膜的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜修復(fù)障礙與許多臨床問(wèn)題有關(guān)，這些疾病的臨床上處理十分棘手。近年來(lái)有學(xué)者提出大膽假設(shè)，認(rèn)為子宮內(nèi)膜的生理性再生修復(fù)是由存在于子宮內(nèi)膜基底層的干細(xì)胞始發(fā)的?？梢赃M(jìn)一步假設(shè)：子宮內(nèi)膜修復(fù)障礙可能由于局部干細(xì)胞枯竭或功能障礙導(dǎo)致。由此推測(cè)：加入外源胚胎干細(xì)胞可能有助于子宮內(nèi)膜修復(fù)。
　　目的：了解同種異體胚胎干細(xì)胞是否有助于急性子宮腔損傷模型小鼠的子宮損傷修復(fù)，移植后胚胎干細(xì)胞能否定植于子宮內(nèi)膜及存在時(shí)間；胚胎干細(xì)胞能否在受損宮腔

2、內(nèi)膜修復(fù)過(guò)程中被誘導(dǎo)分化；以及胚胎干細(xì)胞的成瘤性。
　　方法：復(fù)蘇帶有eGFP基因的小鼠胚胎干細(xì)胞（ESC），用小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）做飼養(yǎng)層培養(yǎng)并腎被膜下移植鑒定其全能性。將ESC移植到內(nèi)膜損傷模型鼠體內(nèi)，試驗(yàn)分三組：第一組ESC移植入單側(cè)內(nèi)膜損傷模型鼠雙側(cè)宮腔；二組，尾靜脈注射ESC到單側(cè)內(nèi)膜損傷模型鼠體內(nèi)。第三組用小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞與ESC共培養(yǎng)，將混合細(xì)胞移植入雙側(cè)內(nèi)膜損傷模型鼠單側(cè)宮腔，另一側(cè)宮腔移植等量PBS；各組

3、分別在1W、2W、3W、4W處死小鼠，熒光顯微鏡直接觀察和HE染色、免疫組化GFP鑒定，觀察ESC在內(nèi)膜損傷鼠宮腔定植遷徙情況及成瘤性和ESC在小鼠體內(nèi)定植情況及損傷對(duì)ESC定植的影響。
　　結(jié)果：ESC在MEF飼養(yǎng)層上生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且可維持未分化狀態(tài)，熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光克??；ESC腎被膜下注射后，可形成畸胎瘤，熒光顯微鏡下可見(jiàn)瘤體發(fā)綠色熒光，HE染色及免疫組化鑒定可見(jiàn)三胚層分化；子宮內(nèi)膜細(xì)胞與ESC共培養(yǎng)后，胚胎干細(xì)胞呈扁

4、平狀克隆樣生長(zhǎng)，熒光顯微鏡下見(jiàn)綠色熒光；ESC內(nèi)膜損傷鼠宮腔內(nèi)移植后不同時(shí)間處死小鼠，體式熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)損傷側(cè)宮腔見(jiàn)綠色熒光，未損傷側(cè)宮腔無(wú)熒光，子宮內(nèi)膜比PBS對(duì)照側(cè)較厚且腺體較豐富；且隨時(shí)間的延長(zhǎng)，ESC可在宮腔內(nèi)形成畸胎瘤，熒光鏡下見(jiàn)綠色熒光；ESC內(nèi)膜損傷鼠尾靜脈注射后處死小鼠，熒光顯微鏡下可見(jiàn)腹壁切口，損傷側(cè)子宮見(jiàn)綠色熒光，未損傷側(cè)宮腔未見(jiàn)熒光；ESC與子宮內(nèi)膜共培養(yǎng)后移植，可見(jiàn)移植側(cè)宮腔內(nèi)見(jiàn)綠色熒光，在觀察期內(nèi)未見(jiàn)腫瘤

5、生長(zhǎng)；熒光組織取材后固定，GFP免疫組化鑒定，可見(jiàn)ESC損傷宮腔內(nèi)移植后，形成的腫瘤組織可見(jiàn)向脂肪、軟骨、腺體、神經(jīng)等組織分化，GFP陽(yáng)性；共培養(yǎng)ESC移植后宮腔修復(fù)良好，可見(jiàn)完整子宮內(nèi)膜上皮及腺體，GFP染色陽(yáng)性；尾靜脈ESC注射后，子宮修復(fù)亦好，GFP染色細(xì)胞呈巢狀分布于子宮內(nèi)膜；共培養(yǎng)ESC移植后宮腔修復(fù)良好，可見(jiàn)完整子宮內(nèi)膜上皮及腺體，GFP染色陽(yáng)性。
　　結(jié)論：ESC可以在內(nèi)膜損傷鼠宮腔內(nèi)定植，并可成瘤；損傷對(duì)ESC在小