PI3K-mTOR抑制劑BEZ235在MGMT陽性的膠質(zhì)瘤細胞治療的研究.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤是具有高度惡性,高侵襲性的原發(fā)腦腫瘤。多形性膠質(zhì)母細胞瘤(GBM)是最常見、最致命的。目前主流的治療方法是多種方法結(jié)合處理,一些適當?shù)妮o助治療會延長患者的生存預期。
　　目前的神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療包括在安全情況下最大限度的切除腫瘤,聯(lián)合術(shù)后放療及口服DNA烷化劑。替莫唑胺(TMZ)的療效根據(jù)GBM的組織來源及甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)啟動子的甲基化的情況有所不同。NVP-BEZ235被證明在體內(nèi)和體外是通過抑制自

2、噬和增加細胞凋亡提高 TMZ對惡性膠質(zhì)瘤的療效。PI3K參與NF-κB-MGMT調(diào)節(jié)。也有將PI3K抑制劑與TMZ聯(lián)合治療以提高療效的研究。PI3K抑制劑能夠抑制腫瘤生長。因為現(xiàn)階段PI3K抑制的研究,BEZ235作為一個具有潛在抗腫瘤的藥物已經(jīng)作為第一批PI3K抑制劑作為臨床試驗中。本研究主要目的在于測試在耐化療的MGMT陽性的膠質(zhì)瘤細胞系中TMZ和BEZ235聯(lián)合治療是否比單獨BEZ及TMZ治療抗腫瘤活性更加有效。
　　本課題

3、從三個方面對PI3K抑制劑BEZ235在MGMT陽性的膠質(zhì)瘤細胞治療的研究:1.PI3K/Akt/mTOR抑制劑之一NVP-BEZ235對腫瘤細胞增殖的影響。2. BEZ235對相關(guān)腫瘤細胞甲基化和非甲基化程度的影響。3.比較細胞系各處理組中MGMT蛋白表達情況。
　　目的:
　　探討MGMT陽性腫瘤細胞系與MGMT陰性細胞腫瘤細胞系之間TMZ治療效果差距,同時通過對PI3K/mTOR抑制劑的NVP-BEZ235聯(lián)合常規(guī)膠質(zhì)

4、瘤化療藥物TMZ聯(lián)合運用,研究不同情況下聯(lián)合處理后是否能提高對耐TMZ的MGMT陽性膠質(zhì)瘤細胞株的治療效果。
　　方法:
　　實驗選取MGMT陽性膠質(zhì)瘤細胞系T98G及MGMT陰性細胞系A(chǔ)172,將對數(shù)期的細胞接種于6孔板、96孔板中,實驗分為對照組和實驗組,在A172腫瘤細胞系內(nèi),使用 TMZ處理組及不使用藥物組。T98G細胞系內(nèi),對照組不使用任何藥物,處理組又分為單獨使用抗腫瘤藥物 TMZ組,單獨使用 PI3K/Akt抑

5、制劑 BEZ235組,TMZ聯(lián)合PI3K/Akt抑制劑BEZ235組。1.在24,48,72小時處理時間中使用MTT法分析腫瘤細胞系個實驗組增殖抑制率,了解各組處理后細胞增殖抑制率的效果及程度。2.使用Methylation PCR比較T98G、A172各自單獨使用TMZ處理組,及T98G中TMZ聯(lián)合BEZ235處理組各組的MGMT基因的甲基化及非甲基化程度。3.量化處理,使用Western Blot實驗方法檢測上部分中各組的MGMT

6、Protein表達及分析統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.TMZ在MGMT陽性細胞系T98G中效果明顯較A172細胞系差,在TMZ聯(lián)合使用不同濃度的BEZ235處理中,效果均較單獨TMZ使用效果好。2. Methylation PCR量化處理結(jié)果提示T98G組中TMZ聯(lián)合BEZ235處理效果較單獨使用TMZ的A172和T98G的抑制率存在統(tǒng)計學意義。3.量化免疫印跡(Western Blot)實驗結(jié)果后,各實驗組MGMT蛋白

7、含量的表達也符合甲基化PCR的結(jié)果,提示了BEZ235處理后明顯的減少了T98G細胞中MGMT的去甲基化程度。
　　結(jié)論:
　　1.MGMT陽性細胞系中單獨使用TMZ效果不佳,聯(lián)合使用BEZ235后,效果較單獨使用增強,其增強效果存在時間及濃度依賴特點;單獨使用BEZ235也對T98G細胞存在細胞殺傷性。
　　2.在T98G細胞系中,BEZ235聯(lián)合TMZ處理顯示更強細胞毒性,提示BEZ235可通過NF-κB-MGMT