紫杉醇長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體對小鼠Lewis肺癌作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討紫杉醇長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體(PLTL)聯(lián)合局部熱療在細胞水平對Lewis肺癌細胞的細胞毒性作用以及誘導細胞凋亡的能力，并研究PLTL聯(lián)合局部熱療在Lewis肺癌荷瘤小鼠體內(nèi)抑制腫瘤生長的效果。通過長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體聯(lián)合局部熱療增強紫杉醇在腫瘤局部濃度，為紫杉醇新劑型的進一步開發(fā)利用提供科學的實驗依據(jù)。
　　方法：①體外培養(yǎng)Lewis肺癌細胞，以含PTX不同濃度的紫杉醇注射液(PTX)、紫杉醇熱敏脂質(zhì)體(PTL)以及紫杉醇長循環(huán)

2、熱敏脂質(zhì)體(PLTL)作用于Lewis肺癌細胞，并與加藥后立即將該培養(yǎng)板置于（42.5±0.5）℃水浴加熱1h后于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24h、48 h、72 h后，MTT法檢測細胞增殖率。②經(jīng)MTT實驗后，采用抑制作用最明顯的含PTX濃度為10μg/ml的PTX、PTL、PLTL作用于Lewis肺癌細胞，并與加藥后立即將該培養(yǎng)板置于（42.5±0.5）℃水浴加熱1h后于37℃、5％CO2孵呼箱中分別培養(yǎng)72 h后，采用流式

3、細胞儀檢測各組細胞的凋亡率。③以C57BL/6小黑鼠為實驗對象，接種Lewis肺癌細胞，構(gòu)建Lewis肺癌荷瘤腫瘤模型。④分別以PTX、PTL和PLTL并聯(lián)合局部熱療對荷瘤小鼠進行其治療。⑤治療期間觀察小鼠生活狀態(tài)，每日測量腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線，檢測腫瘤質(zhì)量，計算瘤重抑瘤率。⑥取腫瘤組織制片，進行病理學檢測。通過蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察腫瘤細胞的形態(tài)學變化。⑦采用流式細胞儀和TUNEL法檢測腫瘤細胞的凋亡情況。⑧分析荷瘤小鼠

4、生存狀況，繪制荷瘤小鼠生存曲線。
　　結(jié)果：⑴PTX、PTL、PLTL對Lewis肺癌細胞均有抑制作用，且隨著劑量的增加其抑制率亦增加。但PTL與PLTL之間，無明顯差別，P＞0.05。⑵流式細胞儀檢測細胞凋亡率，結(jié)果表明杉醇長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體與紫杉醇熱敏脂質(zhì)體聯(lián)合熱療可誘導細胞凋亡。⑶PTL組PLTL組與對照組一樣，均未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，而注射臨床用藥紫杉醇注射液的PTX組的小鼠在注射過程中出現(xiàn)躁動不安，尖叫等嚴重不良反應(yīng)。根據(jù)腫

5、瘤體積繪制腫瘤生長曲線結(jié)果顯示，紫杉醇長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體組抑瘤效果最佳。⑷組織HE染色顯示，PLTL聯(lián)合腫瘤局部熱療可實現(xiàn)主動靶向作用，顯著抑制腫瘤生長，引起腫瘤組織局部炎癥反應(yīng)。⑸流式細胞儀與TUNEL法檢測腫瘤細胞凋亡，三種劑型的紫杉醇在聯(lián)合局部熱療的情況下，凋亡率為:PLTL＞PTL＞PTX。⑹荷瘤小鼠生存實驗結(jié)果表明，PLTL組的小鼠生存期最長，且小鼠生存狀態(tài)最佳。
　　結(jié)論：①紫杉醇、紫杉醇熱敏脂質(zhì)體、紫杉醇長循環(huán)熱敏脂質(zhì)