P38 MAPK信號通路對干細胞體外擴增調(diào)控機制的研究.pdf

1、各種原因引起的表皮缺乏性疾病是臨床常見的治療比較棘手的病種。燒傷，創(chuàng)傷及各種腫瘤手術(shù)后的表皮缺失，眼表角膜緣干細胞缺乏相關(guān)的疾病，如酸堿化學燒傷、熱燒傷、先天性無虹膜、Stevens—Johnson綜合征、瘢痕類天皰瘡等自身免疫性疾病，都會導致表皮的組織缺失。對于這些疾病目前人們還沒找到一種最令人滿意的治療方法。自體或者同種異體表皮移植因為其排斥率低已經(jīng)成為治療首選。然而治療依賴的體表重建又面臨供體組織移植后免疫排斥，供體來源短缺等問題

2、。所以，體外培養(yǎng)的組織工程治療性研究成為許多學者關(guān)注的熱點。 干細胞是一種具有復制能力和多向分化潛能的細胞。在組織工程的細胞學基礎(chǔ)中，干細胞無疑是最好的體外擴增“種子”細胞。但干細胞在體外培養(yǎng)條件下很容易分化而失去增殖功能，至今仍然沒有一個公認的實際有效的組織工程化培養(yǎng)體系。 理想的體外培養(yǎng)體系要滿足兩個條件，一是要在體外保持干細胞的高增殖能力，以便擴增更多的細胞用于移植。二是要能較長時間保持干細胞的特性，為體外培養(yǎng)和移

3、植創(chuàng)造條件。P38MAPK信號通路是細胞內(nèi)的一類穩(wěn)定蛋白，研究表明其參與多種干細胞的分化過程，SB203580是P38MAPK信號通路的特異性阻斷劑。 我們研究阻斷劑SB203580對結(jié)膜上皮干細胞和皮膚上皮干細胞體外擴增的影響。發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中加入10μMSB203580阻斷劑后，體外組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的結(jié)膜上皮片更光滑，細胞更緊密，邊緣整齊，以單層細胞為主。而對照組的結(jié)膜上皮片細胞疏松，組織塊邊緣不規(guī)則，以復層細胞為主。為觀察擴增

4、細胞中的干細胞含量，我們對擴增細胞進行了克隆化培養(yǎng)。結(jié)果顯示阻斷組擴增的表皮細胞能形成更多克隆集落，克隆生成率增加。證明擴增的細胞中有更多的干細胞或前體細胞。阻斷組的組織塊生長指標更好。培養(yǎng)的組織塊加入阻斷劑后，組織塊中上皮干細胞標志物ABCG2，P63，K15及高增殖標志K16和K14表達增加。證明組織塊加入阻斷劑后，經(jīng)過體外培養(yǎng)上皮干細胞仍能保持較好的干細胞特性和高增殖水平。 在結(jié)膜上皮干細胞和皮膚上皮干細胞的體外克隆化培養(yǎng)

5、中，加入10μMSB203580阻斷劑后，干細胞的初次出現(xiàn)時間提前2天，克隆生成率是對照組的3倍。上皮克隆內(nèi)的細胞更小更緊密，核漿比增加；細胞倍增時間更短，更多細胞表達增殖標志物Ki67；流式細胞學分析更多細胞位于S期。證明相比普通培養(yǎng)液，加入10μMSB203580后，其結(jié)膜上皮干細胞和皮膚上皮干細胞確實能保持更高的增殖能力。免疫組織化學染色顯示，阻斷組克隆內(nèi)的表皮細胞表達更多的干細胞標志物如：P63、ABCG2、K15，Realti