基因沉默NMⅡ修復(fù)大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、分類號(hào)：R6815密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：10062學(xué)號(hào)：2011602239學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪眚斜鼻號(hào)碩士學(xué)位論文M【ASTER’SDISSERI’ATIoN論文題目：基因沉默瑚II修復(fù)大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究TITLE：ExperimentalStudyofSilencingNMIIGeneforTreatingSpinalCordInjuryinRats一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)骨外論文作者：李玉琳指導(dǎo)

2、教師：馮世慶導(dǎo)師組成員：寧廣智天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要研究目的；脊髓損傷(SpinalCordInjury，SCI)是脊柱外科最嚴(yán)重的創(chuàng)傷性疾病，具有高發(fā)病率、高致殘性的特點(diǎn)，SCI后促進(jìn)神經(jīng)的再生與修復(fù)始終是此領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。生長錐塌陷抑制軸突的延伸是SCI難以恢復(fù)的關(guān)鍵問題，如何促進(jìn)脊髓損傷后軸突再生、改善抑制軸突再生的微環(huán)境己成為脊髓損傷修復(fù)的研究熱點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道肌動(dòng)蛋白絲和微管構(gòu)成的細(xì)胞

3、骨架在神經(jīng)生長和生長錐導(dǎo)向過程中起著重要作用。NMlI位于RhoA／Rock信號(hào)通路的下游，激活態(tài)的NMII通過調(diào)控細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)促進(jìn)了生長錐的塌陷，抑制軸突的延伸。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)基因沉默或化學(xué)藥物抑制NMII可以明顯提高哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生存能力。因此本課題擬通過制備大鼠脊髓損傷模型研究基因沉默NMII通過工程化調(diào)節(jié)生長錐結(jié)構(gòu)對(duì)損傷局部軸突再生的影響及對(duì)神經(jīng)細(xì)胞存活能力的影響，并通過功能評(píng)分評(píng)估對(duì)大鼠功能恢復(fù)的影響。研究方法：將雌性Wist

4、ar大鼠40只隨機(jī)分為4組，即siRNA注射1組(A組)、siRNA注射2組(B組)、空載體對(duì)照組(C組)和空白對(duì)照組(D組)，每組lO只。利用ImpactorModel—II脊髓打擊器制備大鼠脊髓胸10(TIO)損傷模型(109X25ram)。損傷后大鼠進(jìn)行正常護(hù)理和飲食。構(gòu)建慢病毒載體用以體內(nèi)沉默NMII。傷后8w處死動(dòng)物，采用westernblot技術(shù)檢測(cè)各分組NMII表達(dá)水平，與體外實(shí)驗(yàn)形成互相參照，評(píng)價(jià)體內(nèi)NMII基因沉默效率

5、。采用免疫組化方法觀察神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞存活情況(NF200、GFAP)。采用westernblot技術(shù)觀察軸突再生情況及突觸連接形成情況(NeuN、SYN)，結(jié)合BBB評(píng)分評(píng)價(jià)NMII基因沉默對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能修復(fù)的影響。研宄結(jié)果：成功構(gòu)建慢病毒載體，siRNA注射1組在大鼠體內(nèi)沉默NMIIA的效率高達(dá)95％以上；siRNA注射2組沉默效率約為60％。傷后8w處死動(dòng)物，免疫組化染色結(jié)果顯示：siRNA注射1組神經(jīng)元(NF200)、