不同途徑移植人臍帶間充質干細胞影響糖尿病鼠視網膜病變發(fā)展的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察尾靜脈注射和玻璃體腔移植人臍帶間充質干細胞(human umbilicalmesenchymal stem cells，hUCMSCs)后糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠血糖水平及視網膜功能變化、視網膜腦源性神經營養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophic factor，BDNF)的表達情況，研究hUCMSCs在糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)

2、治療中的可能機制，為進一步明確hUCMSCs對DR的治療作用奠定基礎。
　　方法：
　　尾靜脈注射鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)誘導SD大鼠DR模型。將45只大鼠隨機分為DR組(B組)、尾靜脈注射1*10^6～7 hUCMSCs組0.5ml(C組)、尾靜脈注射安慰劑組0.5ml(D組)、玻璃體腔注射1*10^6～7 hUCMSCs組2μl(E組)、玻璃體腔注射安慰劑組2μl(F組)。正常對照組(A組，8只)和

3、B組無處理。成模后每2-4w進行血糖監(jiān)測。采用FITC-dextran熒光造影視網膜鋪片和蘇木精-伊紅(HE)染色觀察視網膜形態(tài)學變化；使用閃光視網膜電圖(Flash electroretinogram，F-ERG)評估視網膜功能；采用免疫組織化學法觀察視網膜BDNF陽性染色的情況，Image-Pro Plus6.0圖像處理分析軟件分析各組視網膜切片染色區(qū)的平均累積光密度(integrated optic density，IOD)；實時

4、熒光定量PCR(RT-PCR)檢測視網膜中BDNF mRNA的相對表達量。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，組間數據比較采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析、Kruskal-Wallis檢驗和LSD-t檢驗進行統(tǒng)計學分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.血糖水平監(jiān)測：干預前，DM大鼠血糖較高，與同期正常組大鼠相比差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。干預后，各組血糖相比均具有顯著性差異(P=0.000)。C

5、組血糖在各時間點與其余組之間均具有顯著性差異(P<0.01)，該組2w與4w相比差異具有顯著性(P=0.012)。
　　2.FITC-dextran熒光造影視網膜鋪片：A組正常大鼠視網膜血管走形良好，血管管壁平滑，未見視網膜微血管瘤和視網膜新生血管形成。DM大鼠視網膜血管走形迂曲、擴張，可見微動脈瘤，血管呈串珠樣改變，血管周圍可見高熒光滲漏及周邊大片無灌注區(qū)。
　　3.F-ERG：各組暗適應a、b波峰潛時、暗適應b波振幅及振

6、蕩電位(oscilatorypotentials，OPs)總振幅比較，差異均有顯著性(P<0.05)；各組暗適應a波振幅比較，差異均無顯著性(P>0.05)。
　　4.HE染色：A組正常大鼠視網膜各層細胞排列整齊，細胞形態(tài)基本正常。B、D、F組大鼠視網膜各層細胞結構排列紊亂，各層細胞數減少，內界膜不完整，部分出現局部增厚；視網膜內血管擴張，血管內皮細胞增殖。C、E組各層結構排列較紊亂，RGCs、周細胞等各層細胞數較少，未見明顯擴張

7、血管，C組偶見內界膜缺失區(qū)域。
　　5.免疫組織化學染色：A組BDNF表達呈陽性，陽性細胞邊界清晰，主要位于視網膜神經節(jié)細胞層，其他視網膜層內均有表達。B、D、F組BDNF弱陽性表達，各層表達量明顯減少，陽性著色較淺。C、E組BDNF表達增多，E組更為明顯。各時間點各組間視網膜BDNF蛋白表達差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。B、D、F組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸減少，三者在各時間點相比差異均無顯著性(p>0.05)。C、

8、E組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸增加，6w、8w時分別與其他5組相比差異均具有顯著性(P<0.01)。5個DR組BDNF蛋白的表達量隨時間變化差異均有顯著性(P<0.01)。
　　6.RT-PCR檢測視網膜BDNF mRNA的相對表達量：2w時5個DR組間視網膜BDNF mRNA相對表達量差異無顯著性(P=0.301)。4w、6w、8w相比差異均具有顯著性(P=0.000)，C、E組與B、D、F組相比，差異均具有顯著性(P<0.

9、01)。C組與E組相比，僅8w時差異具有顯著性(P=0.009)。5組組內BDNF mRNA的相對表達量均有顯著性差異(P<0.01)。
　　結論：
　　1.尾靜脈注射hUCMSCs能夠顯著降低血糖水平；
　　2.尾靜脈或玻璃體腔注射hUCMSCs均可改善DR視網膜功能，增加BDNF的表達，其中玻璃體腔注射效果更佳；
　　3.DR早期即會對RGCs、周細胞等各層細胞造成損傷；
　　4.DR早期即引起B(yǎng)DNF