不同途徑移植人臍帶間充質干細胞影響糖尿病鼠視網膜病變發(fā)展的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  觀察尾靜脈注射和玻璃體腔移植人臍帶間充質干細胞(human umbilicalmesenchymal stem cells,hUCMSCs)后糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠血糖水平及視網膜功能變化、視網膜腦源性神經營養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)的表達情況,研究hUCMSCs在糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy,DR)

2、治療中的可能機制,為進一步明確hUCMSCs對DR的治療作用奠定基礎。
  方法:
  尾靜脈注射鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)誘導SD大鼠DR模型。將45只大鼠隨機分為DR組(B組)、尾靜脈注射1*10^6~7 hUCMSCs組0.5ml(C組)、尾靜脈注射安慰劑組0.5ml(D組)、玻璃體腔注射1*10^6~7 hUCMSCs組2μl(E組)、玻璃體腔注射安慰劑組2μl(F組)。正常對照組(A組,8只)和

3、B組無處理。成模后每2-4w進行血糖監(jiān)測。采用FITC-dextran熒光造影視網膜鋪片和蘇木精-伊紅(HE)染色觀察視網膜形態(tài)學變化;使用閃光視網膜電圖(Flash electroretinogram,F-ERG)評估視網膜功能;采用免疫組織化學法觀察視網膜BDNF陽性染色的情況,Image-Pro Plus6.0圖像處理分析軟件分析各組視網膜切片染色區(qū)的平均累積光密度(integrated optic density,IOD);實時

4、熒光定量PCR(RT-PCR)檢測視網膜中BDNF mRNA的相對表達量。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,組間數據比較采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析、Kruskal-Wallis檢驗和LSD-t檢驗進行統(tǒng)計學分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
  結果:
  1.血糖水平監(jiān)測:干預前,DM大鼠血糖較高,與同期正常組大鼠相比差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。干預后,各組血糖相比均具有顯著性差異(P=0.000)。C

5、組血糖在各時間點與其余組之間均具有顯著性差異(P<0.01),該組2w與4w相比差異具有顯著性(P=0.012)。
  2.FITC-dextran熒光造影視網膜鋪片:A組正常大鼠視網膜血管走形良好,血管管壁平滑,未見視網膜微血管瘤和視網膜新生血管形成。DM大鼠視網膜血管走形迂曲、擴張,可見微動脈瘤,血管呈串珠樣改變,血管周圍可見高熒光滲漏及周邊大片無灌注區(qū)。
  3.F-ERG:各組暗適應a、b波峰潛時、暗適應b波振幅及振

6、蕩電位(oscilatorypotentials,OPs)總振幅比較,差異均有顯著性(P<0.05);各組暗適應a波振幅比較,差異均無顯著性(P>0.05)。
  4.HE染色:A組正常大鼠視網膜各層細胞排列整齊,細胞形態(tài)基本正常。B、D、F組大鼠視網膜各層細胞結構排列紊亂,各層細胞數減少,內界膜不完整,部分出現局部增厚;視網膜內血管擴張,血管內皮細胞增殖。C、E組各層結構排列較紊亂,RGCs、周細胞等各層細胞數較少,未見明顯擴張

7、血管,C組偶見內界膜缺失區(qū)域。
  5.免疫組織化學染色:A組BDNF表達呈陽性,陽性細胞邊界清晰,主要位于視網膜神經節(jié)細胞層,其他視網膜層內均有表達。B、D、F組BDNF弱陽性表達,各層表達量明顯減少,陽性著色較淺。C、E組BDNF表達增多,E組更為明顯。各時間點各組間視網膜BDNF蛋白表達差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。B、D、F組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸減少,三者在各時間點相比差異均無顯著性(p>0.05)。C、

8、E組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸增加,6w、8w時分別與其他5組相比差異均具有顯著性(P<0.01)。5個DR組BDNF蛋白的表達量隨時間變化差異均有顯著性(P<0.01)。
  6.RT-PCR檢測視網膜BDNF mRNA的相對表達量:2w時5個DR組間視網膜BDNF mRNA相對表達量差異無顯著性(P=0.301)。4w、6w、8w相比差異均具有顯著性(P=0.000),C、E組與B、D、F組相比,差異均具有顯著性(P<0.

9、01)。C組與E組相比,僅8w時差異具有顯著性(P=0.009)。5組組內BDNF mRNA的相對表達量均有顯著性差異(P<0.01)。
  結論:
  1.尾靜脈注射hUCMSCs能夠顯著降低血糖水平;
  2.尾靜脈或玻璃體腔注射hUCMSCs均可改善DR視網膜功能,增加BDNF的表達,其中玻璃體腔注射效果更佳;
  3.DR早期即會對RGCs、周細胞等各層細胞造成損傷;
  4.DR早期即引起B(yǎng)DNF

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