成都地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制和同源性分析.pdf

1、目的:篩選耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的菌株，從基因水平研究碳青霉烯酶和外排泵基因在耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌中的作用，分析成都地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性，為本地區(qū)醫(yī)院感染控制提供重要依據(jù)。
　　方法:1.收集成都地區(qū)臨床和醫(yī)院環(huán)境中分離的鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合群160株，通過(guò)多重PCR對(duì)其中的鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行快速鑒定。2.采用瓊脂稀釋法檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)14種抗生素的耐藥性，篩選耐碳青霉烯類的鮑曼不動(dòng)桿菌。3.通過(guò)多重PCR檢測(cè)耐

2、碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的苯唑西林類酶（OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58和OXA-143）和PCR法檢測(cè)金屬酶（NDM-1、IMP、VIM和SIM），同時(shí)通過(guò)PCR檢測(cè)插入序列ISAbal及其與OXA酶的關(guān)系。4.采用PCR檢測(cè)外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM，熒光定量PCR分別檢測(cè)對(duì)碳青霉烯類敏感和耐藥菌株外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM的表達(dá)情況。5.應(yīng)用DiversiLab系統(tǒng)分析整

3、個(gè)地區(qū)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性。
　　結(jié)果:1.多重PCR結(jié)果顯示，在160株鮑曼不動(dòng)桿菌復(fù)合群中有132株(132/160，82.5％)為鮑曼不動(dòng)桿菌。2.132株鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選到79株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌，耐藥率為59.84％(79/132);藥敏結(jié)果顯示，79株CRAB對(duì)常用抗生素有較高耐藥率，其中對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟，耐藥率分別為79.9％、84.8％，而其余抗生素耐藥率均大于90％。3.多重PCR

4、結(jié)果顯示，在79株CRAB菌株中均檢測(cè)到OXA-51和OXA-23，在20株碳青霉烯類敏感鮑曼不動(dòng)桿菌中只檢測(cè)OXA-51，未檢測(cè)到OXA-23;僅有一株檢出IMP基因，其余碳青霉烯酶基因均未檢測(cè)到，提示產(chǎn)OXA-23基因可能是CRAB的主要耐藥機(jī)制之一;PCR結(jié)果顯示，在79株CRAB菌株中均檢測(cè)到ISAbal序列，同時(shí)在77株CRAB菌株中檢測(cè)到ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)，且通過(guò)測(cè)序比對(duì)發(fā)現(xiàn)ISAbal存在于OXA-23基因上游

5、;同時(shí)發(fā)現(xiàn)含有ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)的77株CRAB菌株對(duì)碳青霉烯類抗生素完全耐藥，而不含ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)的2株CRAB菌株對(duì)其中一種碳青霉烯類抗生素敏感，提示ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)可能與CRAB耐藥相關(guān)。4.PCR結(jié)果顯示，79株CRAB菌株擴(kuò)增外排泵基因AdeB、AdeJ和AbeM的陽(yáng)性率分別為58.2％、96.2％和97.5％，20株敏感鮑曼不動(dòng)桿菌擴(kuò)增外排泵AdeB、AdeJ和AbeM的陽(yáng)性率分別為

6、25％、85％和95％，說(shuō)明對(duì)碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌均可檢測(cè)到外排泵基因，提示外排泵基因表達(dá)及其表達(dá)調(diào)控可能與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥有關(guān)。5.熒光定量PCR結(jié)果顯示，CRAB菌株的外排泵AdeJ基因表達(dá)量比CSAB菌株增加了5.59倍，而外排泵AdeB和AbeM表達(dá)量無(wú)明顯變化，提示AdeJ基因表達(dá)量的改變與CRAB的耐藥有關(guān)。6.DiversiLab系統(tǒng)將40株代表性CRAB菌株分為4個(gè)不同親緣關(guān)系的克隆組及9個(gè)亞克隆

7、組，其中克隆組1為最流行的克隆，且在5家醫(yī)院都有分布，提示CRAB克隆組1在整個(gè)地區(qū)存在播散的可能。
　　結(jié)論:1.通過(guò)分子生物學(xué)方法和瓊脂稀釋法藥敏試驗(yàn)準(zhǔn)確篩選出CRAB菌株。2.整個(gè)成都地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素和其他常用抗生素耐藥廣泛，并存在多重耐藥的現(xiàn)象。3.鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素的一個(gè)主要機(jī)制是產(chǎn)生OXA-23酶，ISAbal存在于OXA-23基因上游，且ISAbal-OXA-23結(jié)構(gòu)可能與CRAB耐藥相