穿心蓮內(nèi)酯抗大鼠銅綠假單胞菌肺部感染作用及機制研究.pdf

1、目的：建立銅綠假單胞菌(PA)肺部感染模型，動態(tài)觀察Toll樣受體4(TLR4)mRNA在大鼠銅綠假單胞菌感染中的表達變化，并探討穿心蓮內(nèi)酯在銅綠假單胞菌肺部感染時的抗菌作用及可能的作用機制。
　　方法：采用氣管滴注法給予銅綠假單胞菌生理鹽水菌懸液，建立大鼠銅綠假單胞菌肺部感染模型。設不同時間段感染組(0h、24 h、48 h、72h、96 h)，分別取大鼠靜脈血及肺泡灌洗液進行白細胞總數(shù)及分類計數(shù)，同時取肺組織做蘇木精-伊紅（H

2、E）染色，觀察大鼠肺組織病理變化，并采用RT-PCR方法，檢測肺組織勻漿中TLR4 mRNA的表達水平變化，分析結(jié)果，并篩選一峰值點。
　　分別于感染后的24 h、48 h，通過腹腔注射方式給予不同劑量的穿心蓮內(nèi)酯(5μg/g、10μg/g、15μg/g、20μg/g)及相應的溶劑二甲基亞砜(DMSO)，于上述峰值點分別取大鼠血液、肺泡灌洗液、肺組織等標本，檢測各指標的水平變化。
　　結(jié)果：銅綠假單胞菌感染后，大鼠血液白細胞

3、總數(shù)于24h下降，隨后上升并于48 h達峰值，中性粒細胞于感染后24 h上升，48h上升達峰值，后下降，淋巴細胞24h下降，后逐步上升，中性粒細胞與淋巴細胞的比值呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢，肺泡灌洗液中白細胞上升于48 h達峰值，肺組織TLR4 mRNA的表達水平也于48 h達峰值;且48 h組血白細胞、肺泡灌洗液白細胞和肺組織勻漿液中TLR4 mRNA水平較其他組高(P＜0.05)，因此選48 h用于后續(xù)實驗。
　　給于穿心蓮內(nèi)

4、酯后，穿心蓮內(nèi)酯各劑量組血液中白細胞總數(shù)與PA組和DMSO組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，隨著穿心蓮內(nèi)酯劑量的增加，白細胞總數(shù)、中性粒細胞下降，呈負相關(guān)關(guān)系，分別為r=-0.93，P＜0.05;r=-0.507，P＜0.05;肺泡灌洗液中白細胞總數(shù)與PA組和DMSO組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），隨著穿心蓮內(nèi)酯劑量的增加，白細胞總數(shù)下降，呈負相關(guān)關(guān)系，分別為r=-0.90，P＜0.05;肺組織病理鏡下觀察各穿心蓮內(nèi)酯組

5、較PA組和DMSO組肺泡壁破壞減輕，中性粒細胞和纖維蛋白滲出減少;各穿心蓮內(nèi)酯劑量組TLR4 mRNA的表達與PA組和DMSO組也有所下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），各劑量組間相比15μg/g組和20μg/g組間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，其他組間有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：銅綠假單胞菌肺部感染可誘導TLR4 mRNA的表達變化;穿心蓮內(nèi)酯可有效地抑制銅綠假單胞菌誘導的肺部感染，其抑菌機制可能通過調(diào)控TLR