梗死后出血轉(zhuǎn)化中基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)及其發(fā)病機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的:目前,急性缺血性腦卒中患者可在可視情況下行大血管取栓術(shù),在發(fā)現(xiàn)癥狀后八小時內(nèi)取栓?？赏ㄟ^血流再通提高患者預(yù)后。然而35.8％到46.7％的患者發(fā)生出血性轉(zhuǎn)化,其中有癥狀的患者占到6.7％～9.9％[1-2]。盡管知道缺血的時間與梗死后出血轉(zhuǎn)化有直接關(guān)系,但是再灌注本身及其更多發(fā)病機(jī)制與梗死后出血轉(zhuǎn)化的關(guān)系的研究并不明確[3]。Aigang Lu[4]等研究表明再灌注損傷后基質(zhì)金屬蛋白酶的激活進(jìn)一步引起基底膜的破壞是再灌注引起神經(jīng)損

2、傷的重要因素。因此進(jìn)一步從缺血時間和再灌注角度進(jìn)行梗死后出血轉(zhuǎn)化發(fā)病機(jī)制研究可以為臨床預(yù)防和治療梗死后出血轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)。本實驗通過觀察大鼠持續(xù)性腦梗死與腦缺血-再灌注及不同缺血時間腦組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá),TNF-α水平,SOD活力和 MOD含量,來進(jìn)一步探討缺血和再灌注的損傷機(jī)制,從而明確出血性轉(zhuǎn)化的發(fā)病機(jī)理,為臨床預(yù)防和治療開辟道路。方法:將健康雄性成年 Wistar大鼠隨機(jī)分為3組:即假手術(shù)組、缺血-再灌注組、持續(xù)腦梗死

3、組。其中缺血-再灌注組根據(jù)缺血時間不同分為缺血3h灌注24h,缺血6h灌注24h,缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24h,共5個亞組。對應(yīng)腦梗死組和假手術(shù)組27h,30h,36h,48h,72h,5個亞組。每個亞組12只老鼠。將大鼠用線栓法制成大腦中動脈閉塞模型,缺血再灌注組在個相應(yīng)缺血時間點將線栓拔出造成缺血再灌注,假手術(shù)組手術(shù)過程同腦梗死組,但未置入栓線。分別于術(shù)后2h進(jìn)行模型成功評價,并于術(shù)后相應(yīng)時間點進(jìn)

4、行神經(jīng)功能障礙評分；用比色法測定手術(shù)后不同時點腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平；用放射免疫法測定細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平；進(jìn)行氯化-2.3.5.三苯基四氮唑(TTC)染色觀察發(fā)生出血轉(zhuǎn)化的腦組織；用光鏡觀察手術(shù)后不同時點腦組織病理改變；用免疫組化方法測定基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)。結(jié)果:缺血-再灌注組和持續(xù)腦梗死組各時點神經(jīng)功能評分顯著低于假手術(shù)組相應(yīng)時點神經(jīng)功能評分(P<0.05)；缺血3h灌注

5、24h與對應(yīng)腦梗死27h.組比較神經(jīng)功能評分明顯升高(P<0.05)；缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24h與對應(yīng)持續(xù)腦梗死36h,48h,72h比較神經(jīng)功能評分明顯降低；缺血6h灌注24h與對應(yīng)時間點持續(xù)腦梗死30h比較神經(jīng)功能評分無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。缺血-再灌注組組內(nèi)隨著缺血時間的延長神經(jīng)功能評分逐漸降低,在缺血48h達(dá)到最低。大鼠腦組織TTC染色,正常腦組織呈紅色,梗死灶呈白色,發(fā)生出血轉(zhuǎn)化的腦組織在白色梗

6、死部位有不同程度紅色,缺血12h灌注24h,缺血.24h灌注24h,缺血48h灌注48h大鼠均有不同程度的出血轉(zhuǎn)化發(fā)生。缺血-再灌注組和持續(xù)腦梗死組各時點SOD活力顯著低于假手術(shù)組相應(yīng)時點SOD活力(P<0.05):缺血3h灌注24h SOD活力明顯高于腦梗死27h組SOD活力(P<0.05),MDA,TNF-α水平和 MMP-9水平則顯著高于假手術(shù)組相應(yīng)時(P<0.05):缺血12h灌注24h,缺血24h灌注24h,缺血48h灌注24

7、h SOD活力較腦梗死36h,48h,72h組明顯降低,MDA,TNF-α水平和MMP-9水平則相反;缺血6h灌注24h與持續(xù)腦梗死30h比較SOD活力,MDA,TNF-α水平和 MMP-9水平無明顯差異。MMP-9表達(dá)與神經(jīng)功能評分和SOD活力呈明顯負(fù)相關(guān)(r>-1,P<0.05),MMP-9表達(dá)與MDA,TNF-α水平呈明顯正相關(guān)(r<1,P<0.05)。光鏡顯示假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)未見明顯病理改變,腦缺血-再灌注組神經(jīng)細(xì)胞顯著壞死,