鋅和維生素E對維甲酸誘導(dǎo)的類馬蹄內(nèi)翻足胎鼠的孕鼠胎盤組織中凋亡基因Bcl-2和Bax表達的影響.pdf

1、目的:通過研究鋅和維生素E對全反式維甲酸誘導(dǎo)類馬蹄內(nèi)翻足畸形胎鼠的產(chǎn)生和孕鼠胎盤凋亡情況的影響，探索其孕鼠胎盤組織凋亡相關(guān)基因表達的變化，來初步探討鋅和維生素E抗凋亡保護作用的機制。
　　方法:將孕SD大鼠隨機分為3組，每組均為10只，于孕10天給予以下處理。實驗組（A組）:將全反式維甲酸(120mg/kg)溶于2ml礦物油中經(jīng)灌胃針注入孕鼠胃內(nèi)，予普通水和飼料喂養(yǎng);抗凋亡干預(yù)組（B組）:灌胃針注入相同濃度的全反式維甲酸，予富含維

2、生素E(500 mg/kg)的大鼠飼料及含ZnSO4·7H2O(227 mg/L)的去離子水喂養(yǎng);正常對照組（C組）:灌胃針注入同等劑量的礦物油，予普通水和飼料喂養(yǎng)。所有孕鼠均于孕20d剖宮產(chǎn)取新鮮胎盤組織，統(tǒng)計類馬蹄內(nèi)翻足胎鼠的畸形發(fā)生率。采用流式細胞術(shù)檢測類馬蹄內(nèi)翻足胎鼠的孕鼠胎盤組織的凋亡發(fā)生率。應(yīng)用熒光定量PCR、Western blot方法檢測類馬蹄內(nèi)翻足胎鼠的孕鼠胎盤組織中凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax的mRNA、蛋白的表達

3、水平，以及應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。
　　結(jié)果:在實驗組和抗凋亡干預(yù)組中均觀察到類馬蹄內(nèi)翻足畸形的胎鼠，單足或雙足畸形，伴或不伴有突眼、脊柱裂、小顱、短尾或無尾等畸形，而對照組中均為正常胎鼠。實驗組與對照組相比，類馬蹄內(nèi)翻足畸形胎鼠的發(fā)生率明顯增加;抗凋亡干預(yù)組與實驗組相比，類馬蹄內(nèi)翻足畸形胎鼠的發(fā)生率明顯減少(P＜0.05);流式細胞檢測結(jié)果顯示實驗組胎盤凋亡率比對照組明顯增加，抗凋亡干預(yù)組胎盤

4、凋亡率比實驗組降低(P＜0.05);RT-PCR、Western blot結(jié)果均顯示實驗組類馬蹄內(nèi)翻足畸形胎鼠的孕鼠胎盤中Bcl-2蛋白表達量比正常對照組降低，而Bax蛋白表達增加;與實驗組相比，抗凋亡干預(yù)組的胎盤Bcl-2表達量明顯增加，Bax表達則降低(P＜0.05)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:實驗組與對照組相比，類馬蹄內(nèi)翻足畸形胎鼠的孕鼠胎盤的Bcl-2蛋白陽性表達率顯著減少，Bax蛋白表達增加;抗凋亡干預(yù)組中Bcl-2蛋白陽性表達率