Noxa在內質網應激誘導的胃腺癌細胞凋亡中的作用.pdf

1、背景及目的:胃癌是我國乃至全球最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,盡管近年因治療手段不斷改進,但胃腺癌對化療藥物的耐受導致療效低下。因此,對胃癌進行分子水平上的研究有可能為胃癌的治療提供新的幫助,從而達到提高胃癌療效的目的。內質網應激被認為普遍存在于腫瘤細胞中,但我們對胃腺癌細胞在內質網應激狀態(tài)下,促凋亡和促生存蛋白表達水平的變化及其表達的調控方式知之甚少。了解內質網應激時細胞的生存和凋亡的調控機制,對克服腫瘤細胞的凋亡耐受有重要意義。Nox

2、a屬于BH3-only家族中重要的促凋亡蛋白,和腫瘤發(fā)生、治療密切相關。本研究利用衣霉素(TM)誘導胃腺癌細胞建立內質網應激性凋亡模型,明確Noxa在胃腺癌細胞內質網應激時的表達情況,進一步探討Noxa在胃腺癌細胞中促凋亡作用及被調控機制。
　　方法:TM處理SGC-7901、BGC-823胃腺癌細胞株和HEK293人胚腎上皮細胞。采用PI單染法測定細胞凋亡率。Westernblot檢測GRP78、caspase-3、caspas

3、e-9、Noxa和Mcl-1蛋白變化。實時熒光定量PCR檢測Noxa、Mcl-1mRNA水平的變化。小干擾RNA(siRNA)技術特異“沉默”Noxa和Mcl-1基因,Westernblot檢測“沉默”基因后Noxa、Mcl-1蛋白水平的變化,流式細胞術測定細胞凋亡率的變化,Westernblot檢測caspase-3、caspase-9蛋白水平的變化。
　　結果:TM處理胃腺癌細胞后,GRP78表達升高;TM誘導胃腺癌細胞凋亡具

4、有時間和劑量相關性,與對照HEK-293細胞相比,兩株胃腺癌細胞對衣霉素誘導的凋亡都不敏感;兩株胃腺癌細胞中caspase-3和caspase-9活化較弱。Noxa和Mcl-1在蛋白水平表達升高,它們的mRNA水平表達亦升高。在SGC-7901細胞中,“沉默”Mcl-1基因后,TM處理細胞24h細胞凋亡率為(46.76±1.8)％,caspase-3和caspase-9明顯活化;“沉默”Noxa基因細胞凋亡率為(6.76±1.5)%,c