曲尼斯特對大鼠血管平滑肌細胞增殖、凋亡及p57、c-myc表達的影響.pdf

1、目的:
　　觀察曲尼斯特對大鼠血管平滑肌細胞(AVSMC)增殖、凋亡及對p57、c-myc表達的影響,初步探討其可能的作用機制。
　　方法:
　　酶消化法原代提取SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞進行體外培養(yǎng),取5-8代細胞進行實驗。細胞按藥物加入濃度不同共分為5組,分別為曲尼斯特0、12.5、25、50、100mg/L組,MTT比色法測定藥物處理12、24、48小時后各組細胞增殖速率,流式細胞學和原位細胞凋亡檢測試劑盒法(T

2、UNEL)檢測藥物處理12小時后細胞凋亡情況,RT-PCR法分別檢測藥物作用48小時后p57表達及作用12小時后c-myc表達情況。
　　結果:
　　MTT比色法觀察發(fā)現(xiàn)不同濃度曲尼斯特組細胞生長率較對照組降低,其生長抑制率隨曲尼斯特加入濃度和時間增加而增加(P〈0.05),表明曲尼斯特抑制VSMC增殖在一定范圍內存在濃度和時間依賴,經RT-PCR擴增后,凝膠成像可見VSMC中P57表達隨藥物濃度的增加而增加,提示曲尼斯特可

3、能通過誘導p57表達抑制細胞增殖;流式細胞學和原位細胞凋亡檢測試劑盒法(TUNEL)檢測VSMC細胞凋亡示細胞凋亡率較對照組增加,并且隨著曲尼斯特濃度的增加VSMC凋亡率越來越高(P〈0.05),表明曲尼斯特誘導 VSMC凋亡在一定范圍內存在濃度依賴,而RT-PCR擴增后的凝膠成像可見隨著藥物濃度增加VSMC細胞內c-myc表達減少,提示曲尼斯特可能通過抑制c-myc表達促進VSMC凋亡。
　　結論:
　　1.尼斯特可抑制S

4、D大鼠VSMC增殖,并且該抑制作用在一定范圍內有濃度及時間依賴關系;曲尼斯特可誘導VSMC凋亡,并且該誘導作用在一定范圍內有濃度依賴關系。
　　2.尼斯特可誘導SD大鼠VSMC p57 mRNA的表達、抑制c-myc mRNA的表達,并且曲尼斯特對p57、c-myc mRNA表達的影響在一定范圍內有濃度依賴關系。
　　3.尼斯特可能通過誘導P57 mRNA的表達抑制VSMC增殖,通過抑制c-myc mRNA的表達來促進VSM