紅花生理活性成分的分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、紅花(Flos carthami)系菊科植物紅花(Carthamusr tinctorius L.)的干燥花，是一種傳統(tǒng)的活血化瘀、通經(jīng)止痛的常用中藥。近代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紅花具有抗凝血、抗血栓、抗氧化等生理活性，在防治腦血栓、心肌梗塞、冠心病等心腦血管疾病方面有確切療效。 本文對(duì)紅花抗凝血主要活性成分進(jìn)行了篩選、分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定；研究了其生理活性以及含量的測(cè)定方法；建立了主要活性成分紅花黃色素的浸提動(dòng)力學(xué)模型，優(yōu)化了其提取與

2、精制的工藝條件，并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行了探討。 利用溶劑萃取、乙醇沉淀、聚酰胺吸附層析等方法對(duì)紅花粗提物進(jìn)行逐步分離，以體外抗凝血活性為指標(biāo)進(jìn)行活性追蹤，篩選出了抗凝血活性最強(qiáng)的組分(F3組分)。利用反相硅膠(ODS)柱、Sephadex LH-20柱對(duì)組分F3進(jìn)行反復(fù)層析、純化，得到了化合物A～G共7個(gè)單體。 通過(guò)紫外光譜、電噴霧質(zhì)譜及核磁共振等手段，在參閱相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上對(duì)所得到的7個(gè)單體進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)7個(gè)單

3、體均為半醌式查耳酮類化合物，屬于紅花黃色素類成分。證實(shí)紅花黃色素為紅花活血化瘀、抗凝血、防血栓的主要成分?；衔顰、C、G尚未見(jiàn)到有文獻(xiàn)報(bào)道。 體外抗凝血試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)劑量為50μg/mL時(shí)，化合物A～G可使活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)增加到對(duì)照組的2.1～3.7倍，凝血酶時(shí)間(TT)增加到對(duì)照組的1.6～3.6倍?？疾鞆募t花中篩選分離得到的抗凝血組分F3對(duì)小鼠體內(nèi)血栓形成的影響，發(fā)現(xiàn)組分F3對(duì)膠原蛋白．腎上腺素誘發(fā)小鼠血栓形

4、成的抑制率為33.3％～66.7％；對(duì)血管損傷誘發(fā)小鼠血栓形成的抑制率為17.9％～52.7％，并呈量．效相關(guān)性。 采用脂質(zhì)體氧化法研究了化合物A～G的抗氧化能力?；衔顰～G抗脂質(zhì)體氧化能力為： G>F>B≈Vc>D>C>A>E。比較了化合物A～G對(duì)化學(xué)發(fā)光法產(chǎn)生的超氧陰離子自由基[O<,2><'->]、羥基自由基[·OH]和穩(wěn)定自由基-N，N-二苯基三硝基苯肼自由基[DPPH·]的清除效果。清除超氧陰離子自由基[O<,2><

5、'-·>]的能力： F>G>D≈Vc>B>C≈A>E；清除羥基自由基[OH]的能力： F>G>D>Vc>B>C>A>E；清除N，N-二苯基三硝基苯肼自由基[DPPH·]的能力： F>G>Vc>B>D>C>A>E。 對(duì)高效液相色譜法和分光光度法測(cè)定紅花黃色素含量進(jìn)行了研究，確立了檢測(cè)波長(zhǎng)和色譜條件。5種不同產(chǎn)地的紅花，總黃色素含量(以羥基紅花黃色素A計(jì))在2.43％～6.14％之間，有顯著差別。 以質(zhì)量平衡方程式和Arrh

6、enius方程為基礎(chǔ)，通過(guò)試驗(yàn)測(cè)定與計(jì)算，得到了紅花黃色素浸提的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，建立了浸提的動(dòng)力學(xué)模型。 采用響應(yīng)面分析法對(duì)紅花黃色素提取的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化。以pH8.2的水溶液為溶劑，液料比25:1(mL/g)，提取溫度53℃，提取時(shí)間64min，黃色素的浸提率最高，此條件下經(jīng)2次浸提，黃色素浸提率可達(dá)到92.5％。 測(cè)定14種大孔吸附樹脂對(duì)紅花黃色素的吸附率與解吸率，發(fā)現(xiàn)X-5大孔吸附樹脂最適合紅花黃色素的精制。紅花黃

7、色素水提液在X-5樹脂上的吸附流速為每小時(shí)4.8倍床體積，用50％乙醇水溶液解吸，解吸流速為每小時(shí)2.0倍床體積，解吸劑用量為4.0床體積時(shí)，精制效果較好，可使黃色素含量由13.4％提高到45.6％，回收率為90.2％。 研究了溫度、光照、及相態(tài)對(duì)紅花黃色素穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)水溶液狀態(tài)下，黃色素對(duì)光照和高溫較敏感，易于分解破壞，而固態(tài)紅花黃色素比較穩(wěn)定。在室溫、避光條件下存放100天，水溶液狀態(tài)黃色素破壞率高達(dá)59.5％，而固態(tài)