微囊化骺板軟骨細胞移植修復幼兔骺板損傷的實驗研究.pdf

1、因外傷、感染、腫瘤等原因造成的骺板損傷是兒童特有的常見疾病，損傷后出現(xiàn)骺板部分早閉，嚴重者將導致患兒肢體短縮及成角畸形。目前，臨床上主要采用切除骨橋，填充脂肪、骨水泥或骨蠟等方法治療骺板早閉。隨著組織工程學的發(fā)展，組織工程化骺板細胞廣泛應用于骺板損傷模型，并取得了一定實驗效果。然而，同種異體骺板細胞的抗原性限制其臨床應用。本研究應用APA微囊包裹同種異體骺板細胞以減少機體免疫排斥反應，同時通過釋放TGF-D 1誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨

2、細胞方向分化，以達到修復骺板損傷的目的。
　　 目的：建立骺板細胞的體外分離、培養(yǎng)及凍存的實驗方法；制備APA微囊化骺板細胞，并觀察其對骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導分化作用；將APA微囊化骺板細胞植入骺板缺損區(qū)，觀察其能否阻止骨橋形成、延長骺板開放時間及恢復肢體的縱向生長能力。
　　 方法：（1）體外分離、培養(yǎng)幼兔股骨遠端及脛骨近端的骺板細胞；并進行甲苯胺藍、番紅“0”及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色，鑒別骺板細胞在體外培養(yǎng)時的生物

3、學表型；通過ELISA方法檢測骺板細胞對TGF-β1等細胞因子的分泌情況。（2）制備APA微囊化骺板細胞，并檢測微囊內(nèi)骺板細胞對TGF-β1的釋放情況；將微囊化骺板細胞與BMSCs共培養(yǎng)，觀察誘導后的BMSCs是否具備軟骨細胞的生物學表型。（3）構(gòu)建幼兔股骨遠端骺板損傷模型，隨機分為4組，分別將APA微囊化骺板細胞、APA空白微囊及骺板細胞植入缺損模型，并設置空白組作為對照。術(shù)后進行雙下肢X線片檢查對比觀察雙側(cè)股骨短縮及成角畸形情況，在

4、4、8、12、16周各組分別取材、染色，觀察骺板缺損部分的修復情況。
　　 結(jié)果：（1）通過體外分離方法獲得大量具備良好生物學活性的骺板細胞，CCK-8生長曲線顯示骺板細胞在體外培養(yǎng)時增殖情況良好；組織化學染色證實其具有正常的骺板細胞表型。
　　 （2）骺板細胞在微囊凝膠中培養(yǎng)時，生長、增殖情況良好，并向細胞周圍分泌糖胺聚糖及Ⅱ型膠原等細胞外基質(zhì)，而且通過微囊膜釋放TGF-β1誘導BMSCs向軟骨細胞方向分化。
　

5、　 （3）微囊化骺板細胞植入組顯示在缺損部位可見柱狀結(jié)構(gòu)的骺板樣細胞以及類軟骨陷窩樣結(jié)構(gòu)，在缺損區(qū)周圍有大量微囊化細胞，呈圓球形，形態(tài)完整，微囊內(nèi)可見存活的骺板細胞。X線片顯示肢體出現(xiàn)輕度短縮及成角畸形，其程度均小于其余組別（P<0.05）。空白微囊組顯示骺板缺損充滿微囊和骨小梁結(jié)構(gòu)。骺板細胞植入組可見少量散在的骺板細胞，周圍出現(xiàn)淋巴細胞炎癥反應?？瞻捉M缺損區(qū)域可見結(jié)締組織和血管，缺損空腔塌陷形成骨橋。
　　 結(jié)論：本實驗結(jié)果