基質細胞衍生因子聯(lián)合外周血內皮祖細胞移植治療裸鼠肢體缺血的實驗研究.pdf

1、目的:血管內皮祖細胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)作為能循環(huán)、增殖和分化為成熟血管內皮細胞的一類前體細胞,它們不僅參與胚胎期的血管發(fā)育,也存在于成體的骨髓及外周血,在成年機體血管新生中起重要作用。近年來的研究表明EPCs在下肢缺血性疾病的發(fā)生、發(fā)展中扮演了重要角色,血管內皮祖細胞數(shù)量減少預示血管內皮修復能力降低,血管疾病發(fā)生率增高。EPCs能在缺血局部形成新生血管,這種治療性血管新生(neovas

2、cularization)成為治療肢體缺血性疾病的研究熱點,并已取得了初步成果。
　　骨髓基質細胞衍生因子-1(stromal cell–derived factor-1,SDF-1)是近年經(jīng)過實驗驗證的一種能夠促使EPCs向血管損傷或組織缺血處歸巢的細胞因子。其中SDF-1α是已知SDF-1家族中在骨髓基質細胞、內皮細胞及造血祖細胞中連續(xù)表達的一個亞型。
　　本實驗通過建立裸鼠后肢缺血模型,研究機體內SDF-1對內皮祖細胞

3、功能的影響,評價血管新生情況。研究SDF-1及其拮抗劑AMD3100對EPCs歸巢及血管形成能力的影響。為干細胞移植及基質細胞衍生因子治療肢體缺血提供實驗依據(jù),同時為增強臨床干細胞移植效果提供新的途徑。
　　方法:取經(jīng)過rhG-CSF動員的健康成年人的外周血,密度梯度離心法提取單個核細胞,予以分離誘導培養(yǎng),使用免疫熒光的方法鑒定EPCs。結扎裸鼠股動脈,建立裸鼠后肢缺血模型,將裸鼠隨機分為缺血對照組(A組)、EPC移植組(B組)、

4、SDF-1局部應用組(C組)、SDF-1聯(lián)合EPC移植組(D組)、SDF-1聯(lián)合AMD3100處理后EPC移植組(E組)。分別通過微量注射器于裸鼠尾靜脈適量EPCs或等量經(jīng)含AMD3100的培養(yǎng)基孵育1h的EPCs懸液,裸鼠后肢腓腸肌部位使用微量注射器注射適量SDF-1,移植后第3、7天免疫組化法檢測后肢腓腸肌CD34+VEGFR+細胞數(shù),第28天通過免疫組化標記內皮細胞表面標志Ⅷ因子,檢測缺血區(qū)新生毛細血管密度。
　　結果:誘導

5、培養(yǎng)7天后的EPCs呈梭形或圓形;并且有放射狀的細胞集落形成。DiI-acLDL和FITC-UEA-1雙染色陽性,發(fā)黃色熒光。移植第3天和第7天,對照組、EPCs組、SDF-1組、SDF-1+EPCs組、SDF-1+AMD3100 EPCs組雙陽性細胞數(shù)分別為0.00±0.00個/HP、5.30±0.65個/HP、0.00±0.00個/HP、10.31±0.63個/HP、1.86±0.17個/HP和0.00±0.00個/HP、7.05±

6、0.18個/HP、0.00±0.00個/HP、11.81±0.53個/HP、2.83±0.48個/HP,第28天新生毛細血管數(shù)分別為3.00±0.13個/HP、6.15±0.04個/HP、6.20±0.10個/HP、10.65±0.08個/HP、6.21±0.08個/HP。
　　結論:人外周血單個核細胞體外能夠誘導分化為EPCs;SDF-1局部應用可增加缺血區(qū)CD34+VEGFR+細胞浸潤數(shù)量(P＜0.05),并可提高缺血區(qū)新生血