Surfactin的結(jié)構(gòu)鑒定及其誘導乳腺癌細胞MCF-7凋亡的研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種脂肽類生物表面活性劑，其中的Surfactin由于具有很強的表面張力以及廣泛的生物活性受到國內(nèi)外研究者的關(guān)注。目前，國內(nèi)外對脂肽Surfactin的研究主要集中在其表面活性方面，而對其生物活性特別是在抗腫瘤活性方面的研究少有報道。本論文以從納豆中分離得到的Bacillus natto TK-1為研究對象，在前期工作的基礎(chǔ)上，對脂肽進行了分離純化，并研究了Surfactin對細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用，同時研究了

2、MCF-7細胞周期變化及凋亡現(xiàn)象。從相關(guān)蛋白方面考察了Surfactin誘導乳腺癌細胞凋亡的信號途徑。以確定Surfactin誘導乳腺癌細胞凋亡的主要途徑。
　　 利用酸沉、醇提和薄層層析等方法從Bacillus natto TK-1發(fā)酵液中分離得到的脂肽經(jīng)過HPLC、ESI-MS和IR分析可知是分子量為1036D的脂肪酸鏈上有15個碳的環(huán)狀脂肽Surfactin。通過四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)法發(fā)現(xiàn)Surfactin在體外

3、可以很好的抑制腫瘤細胞MCF-7的增殖，并且呈現(xiàn)出濃度和時間依賴關(guān)系，其中細胞被處理48 h時的IC50是38.77mg/L。倒置顯微鏡和熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)Surfactin可以引起細胞出現(xiàn)一些典型的形態(tài)學改變。通過原位缺口末端標記技術(shù)檢測凋亡(TUNEL)發(fā)現(xiàn)Surfactin可誘導MCF-7細胞凋亡，而且這種抑制作用呈現(xiàn)明顯的時間依賴性。Fluo-3/AM探針激光共聚焦顯微鏡檢測細胞內(nèi)[Ca2+]i相對熒光強度的變化隨著時間的延長由