PEG修飾的長春瑞濱脂質體的研究.pdf

1、目的:長春瑞濱(vinorelbine,VRB)是由法國皮爾·法伯公司研發(fā)的半合成長春堿類物質,為抗有絲分裂的細胞周期特異性藥物,本品為廣譜抗腫瘤藥物。長春瑞濱用于轉移性乳腺癌、卵巢癌及非小細胞肺癌的治療。長春瑞濱在使用中不良反應較其他長春堿類藥物略輕,但是在給藥過程中還是會有很多不良反應。主要為骨髓抑制導致的紅細胞、白細胞、血小板減少,脫發(fā),手腳麻木等。
　　 脂質體作為抗腫瘤藥物的載體,它可以減少藥物在正常組織的分布,增加藥

2、物在腫瘤組織的蓄積量,從而改善藥物的治療指數。傳統(tǒng)的脂質體在體內很容易被免疫系統(tǒng)識別和吞噬,因此脂質體可能還沒有到達靶區(qū),就已經被機體清除掉了而無法發(fā)揮其靶向作用。長循環(huán)脂質體又稱隱形脂質體,能夠阻止巨噬細胞對脂質體的識別和攝取,從而延長脂質體在血中的循環(huán)時間,進而借助EPR效應富集到腫瘤組織中,最終實現腫瘤的被動靶向。此外,長循環(huán)脂質體由于表面覆蓋了聚乙二醇(PEG)親水保護層,能夠避免脂質體聚集,可以提高其在儲存期內的穩(wěn)定性。

3、>　　 基于以上考慮,本研究采用長春瑞濱為模型藥物,研究其PEG修飾的脂質體制劑,以使所輸送藥物定向釋放、提高藥物的治療指數、降低藥物的毒性,并且提高藥物的穩(wěn)定性。
　　 方法:在預實驗的基礎上初步確定長春瑞濱脂質體的制備方法:首先制備以不同銨鹽(如硫酸鹽、對羥基苯磺酸鹽、磺基水楊酸鹽)為內相的空白脂質體,然后通過柱透析法置換外相溶液,然后將藥物與空白脂質體溶液混合孵育,得到長春瑞濱脂質體。
　　 以包封率為指標,通過

4、考察不同的內相溶液,不同的PEG修飾方法,以及不同的PEG用量對脂質體的影響,最后通過小鼠藥代動力學研究確定了長春瑞濱脂質體的最佳處方。
　　 對制備得到的長春瑞濱脂質體進行了質量研究,主要包括其外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、ZETA電位、包封率、體外釋放率、溶血卵磷脂、含量、有關物質等指標的測定。并且進行了長春瑞濱脂質體的影響因素和6個月長期穩(wěn)定性試驗。
　　 選用BDF1小鼠作為動物模型,分別對長春瑞濱溶液和不同量

5、PEG修飾的脂質體進行體內藥代動力學研究,計算小鼠體內藥動學參數。
　　 選用BDF1小鼠尾靜脈注射不同劑量的長春瑞濱游離藥和脂質體,進行了急性毒性研究,采用小鼠體重下降比例評價藥物的最大耐受劑量。
　　 選用BDF1小鼠為動物模型,前肢腋下接種Lewis肺癌腫瘤細胞,分別給予給予長春瑞濱游離藥和脂質體,使用測量瘤徑的方法,動態(tài)觀察受試藥的抗腫瘤作用。
　　 結果:在雙層PEG修飾的長春瑞濱脂質體研究中發(fā)現了PE

6、G導致藥物泄露的現象,隨后采用后PEG修飾的方法得到了最佳的處方:采用磺基水楊酸作為內相,氫化磷脂酰膽堿與膽固醇比例為3:1,每10mg磷脂載藥2mg,之后再加入4.2％的PEG化磷脂進行表面修飾,所制備長春瑞濱脂質體包封率接近100％。
　　 質量研究結果顯示:三批長春瑞濱脂質體的平均檢測結果如下:pH值為6.52；滲透壓為299 mOsmol/Kg；平均粒徑為94.35nm；平均ZETA電位為-20.09mV；包封率為99.

7、8％；溶血磷脂小于0.5 mg/ml；含量98.8％；總雜質0.63％。
　　 穩(wěn)定性結果顯示:長春瑞濱脂質體對光照和高溫敏感；產品在2-8℃條件下貯存6個月,外觀性狀良好,各項指標沒有明顯變化,有關物質略有增加,但都在限度內。說明脂質體在冷藏條件下保存時穩(wěn)定性較好。
　　 藥動學試驗表明:長春瑞濱溶液和不同量PEG修飾的脂質體組的血漿藥代動力學存在顯著差異,脂質體處方半衰期均遠大于游離藥,而外層PEG修飾的脂質體之間,

8、分別具有顯著性差異(p<0.05),說明隨著PEG含量的增加,藥物在體內循環(huán)時間延長。
　　 急性毒性試驗表明:長春瑞濱游離藥與脂質體的最大耐受劑量相似,均為43.1mg/kg左右,認為脂質體沒有明顯減輕藥物毒性的作用。
　　 藥效學試驗結果表明:與空白對照組相比,長春瑞濱游離藥組和脂質體組均顯著減緩腫瘤的生長速率,并且脂質體效果明顯優(yōu)于游離藥,其抑瘤效果依次為:脂.30mg/kg>脂15mg/kg>脂7.5mg/kg≈