流感病毒感染的中性粒細胞作為載體介導病毒對宿主機體的多器官感染.pdf

1、自2009年H1N1甲型流感病毒的全球大爆發(fā)后，21世紀的人類已經經歷了數次流感病毒的季節(jié)性和區(qū)域性小流行，由于其爆發(fā)迅速而且傳播廣泛的特點，極易導致成千上萬人的感染和死亡。H1N1和H5N1甲型流感病毒是兩株在世界范圍內對人類健康具有極大威脅的新型流感病毒，H1N1流感病毒擁有很高的人傳人傳播率，而高致病性禽流感病毒H5N1則擁有超過60％的高致死率。早先的研究發(fā)現，H1N1流感病毒擁有兩段H5N1流感病毒基因序列片段，是擁有HIN1

2、和H5N1兩種類型特征的流感病毒。值得注意的是這兩種病毒株擁有極高的相似性，尤其是致病性和致死性更高的2009 H1N1與H5N1相比，則擁有更多癥狀上的相似性。
　　我們以前的研究結果表明H5N1禽流感病毒感染的病人存在多器官感染的現象，包括肺部以外的脾臟、肝臟、淋巴結、胃腸道、腎臟和腦等器官。從H5N1病人的外周血中可檢測到病毒血癥及被感染的免疫細胞，因此病毒極有可能是通過病毒血癥或者被感染的免疫細胞而導致肺外廣泛播散和多器官

3、感染的結果。此外，2009 H1N1感染的病人尸檢報告指出亦存在中性粒細胞被病毒感染的現象，至此我們猜測中性粒細胞很可能作為流感病毒的載體之一介導人體多器官感染。
　　為了證實這一假設的正確性我們進行了以下三個方面的工作：1.分離和純化人的外周血中性粒細胞；2.驗證中性粒細胞是否可以被2009 H1N1流感病毒感染并且激活病毒在細胞的復制和釋放；3.細胞共培養(yǎng)實驗驗證病毒感染的中性粒細胞是否可介導宿主機體多器官感染。主要的實驗結果

4、如下：
　　1.分離和純化人的外周血中性粒細胞。
　　從健康志愿者的血液樣本中分離純化新鮮的中性粒細胞。通過免疫熒光法和流式細胞術驗證分離細胞的特異性及其純度。實驗結果顯示分離的中性粒細胞純度高達99.2%。2.2009 H1N1流感病毒株感染人外周血中性粒細胞并且激活病毒顆粒在細胞內的復制和胞外釋放。
　　將分離出的中性粒細胞與2009 H1N1流感病毒共同孵育，利用實時熒光定量PCR、免疫蛋白質印記和免疫熒光法等實

5、驗技術，我們證實了2009 H1N1可以感染人的中性粒細胞，并可引起中性粒細胞形態(tài)發(fā)生顯著地變化，包括細胞膜的完整性損壞、核固縮和核碎裂等。通過 TCID50實驗，我們在病毒感染后的中性粒細胞培養(yǎng)上清中檢測到新釋放出的有活性的成熟病毒顆粒。以上這些結果顯示2009 H1N1病毒可以感染中性粒細胞并在其中復制進而釋放出新增殖的、成熟的病毒顆粒。
　　3.細胞共培養(yǎng)實驗驗證病毒感染的中性粒細胞可作為載體介導病毒對宿主的多器官感染。

6、r>　　通過與人的正常細胞系共培養(yǎng)，我們發(fā)現2009 H1N1流感病毒感染的中性粒細胞可釋放出新的成熟病毒顆粒感染其它細胞。利用免疫細胞化學法和流式細胞術檢測手段，我們發(fā)現新合成的病毒顆粒對細胞的感染率更高。
　　綜上所述，本研究的實驗結果顯示2009 H1N1流感病毒不僅可以感染人的中性粒細胞，而且還可以在細胞內完成復制并釋放出成熟的病毒顆粒。因此，2009 H1N1流感病毒感染的中性粒細胞可以視為流感病毒的載體而介導宿主機體的