滋陰活血方劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠牙周組織VEGF和IL-6表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過建立大鼠糖尿病動(dòng)物模型，觀察糖尿病時(shí)牙周組織中VEGF及IL-6的改變及病理變化，探討滋陰活血方劑防治作用，為臨床中藥防治糖尿病牙周炎提供理論依據(jù)。 方法：選用6月齡雄性Wistar大鼠36只，隨機(jī)分為4組：正常組(8只)、糖尿病組(10只)、糖尿病滋陰活血方劑治療組(中藥組)(9只)、糖尿病尿酸鹽治療組(西藥組)(9只)。糖尿病組、中藥組、西藥組腹腔注射STZ溶液(按45mg/kg注射)，制備糖尿病模型。正常組腹腔注

2、射生理鹽水(按45mg/kg注射)。注射后三天尾尖采血測(cè)空腹血糖，用代謝籠收集12小時(shí)尿液測(cè)定尿糖，確定造模成功。自建立糖尿病模型第1天起，中藥組每只大鼠3ml/天(含生藥1g/ml)中藥灌喂；西藥組尿酸鹽(Urate)溶液灌喂，每只大鼠20ml/天(Urate用量160mg/kg/天)；正常組和糖尿病組自由飲水。持續(xù)喂養(yǎng)3個(gè)月。在3個(gè)月時(shí)再檢測(cè)血糖、尿糖、體重一次。并將全部動(dòng)物股動(dòng)脈放血處死，迅速分離上頜骨，置于lO％多聚甲醛緩沖溶液

3、中固定，EDTA脫鈣，制作牙周組織切片，進(jìn)行HE染色，光鏡觀察；行IL-6、VEGF免疫組織化學(xué)染色，觀察IL-6、VEGF表達(dá)并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1糖尿病動(dòng)物模型的建立； 腹腔注射STZ后第三天進(jìn)行空腹血糖檢測(cè)，并用代謝籠收集12小時(shí)尿液。注射STZ大鼠空腹血糖均高于15mmol/L，尿糖+++以上，造模成功。3個(gè)月后處死動(dòng)物前，測(cè)量動(dòng)物空腹血糖及體重，糖尿病組、西藥組血糖明顯高于正常組和中藥組(P＜0.

4、01)，糖尿病組與西藥組血糖無明顯差異(P＞0.05)；西藥組血糖高于中藥組(P＜0.05)；中藥組血糖高于正常組(P＜0.01)。糖尿病組、中藥組、西藥組體重明顯低予正常組(P＜0.01)；糖尿病組、中藥組、西藥組三組間無明顯差異(P＞0.05)。 2大鼠牙周組織形態(tài)學(xué)觀察正常組：結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界，與牙體組織結(jié)合牢固，溝內(nèi)上皮無炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙齦纖維及牙周膜韌帶纖維排列有序、整齊；牙槽嵴項(xiàng)無吸收。 糖尿病組：結(jié)合上皮附著

5、于釉牙骨質(zhì)界，牙齦上皮及固有層內(nèi)有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；膠原纖維排列紊亂，牙齦、牙周膜毛細(xì)血管數(shù)目增多、管腔擴(kuò)張充血；深部固有牙槽骨、牙槽嵴項(xiàng)可見破骨細(xì)胞。 中藥組：結(jié)合上皮附著于釉牙骨質(zhì)界，牙齦上皮及固有層內(nèi)有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙齦纖維及牙周膜韌帶纖維排列有序、整齊；固有牙槽骨可見少量破骨細(xì)胞。 西藥組：與中藥組表現(xiàn)相似。 3免疫組化觀察3.1牙周組織中VEGF的表達(dá)正常組：牙周組織VEGF表達(dá)較弱。牙齦表面上皮棘層、

6、粒層及表層細(xì)胞弱陽性表達(dá)，基底細(xì)胞陰性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞弱陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)散在分布。 糖尿病組：牙周組織VEGF表達(dá)較強(qiáng)。牙齦表面上皮棘層、粒層及表層細(xì)胞陽性表達(dá)，基底細(xì)胞陰性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)陽性表達(dá)散在分布。中藥組：牙齦表面上皮棘層、粒層、表層細(xì)胞弱陽性表達(dá)，基底細(xì)胞陰性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞弱陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)散在分布。 西藥組：與中藥組表達(dá)相似。

7、 3.2牙周組織中IL-6的表達(dá)正常組：牙齦表面上皮棘層、粒層、表層細(xì)胞弱陽性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞弱陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)散在分布。 糖尿病組：牙齦表面上皮棘層、粒層、表層細(xì)胞陽性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)陽性表達(dá)散在分布。 中藥組：牙齦表面上皮棘層、粒層、表層細(xì)胞弱陽性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞弱陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)散在分布。 西藥組：牙齦表面上皮棘層、粒層、表層細(xì)

8、胞弱陽性表達(dá)，牙周膜成纖維細(xì)胞弱陽性表達(dá)，骨髓腔基質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)散在分布。 4半定量分析結(jié)果VEGF免疫組化平均光密度值(OD)糖尿病組低于正常組、中藥組、西藥組(P＜0.01)；正常組與西藥組、中藥組無明顯差異(P＞0.05)；西藥組與中藥組無明顯差異(P＞0.05)。 IL-6免疫組化平均光密度值(OD)糖尿病組低于中藥組(P＜0.05)、低于正常組與西藥組(P＜0.01)；中藥組低于西藥組(P＜0.05)；正常組與

9、中藥組無明顯差異(P＞0.05)；正常組與西藥組無明顯差異(P＞0.05)。結(jié)論：1.通過腹腔注射STZ建立了大鼠糖尿病模型。2.糖尿病大鼠牙周組織中VEGF及IL-6表達(dá)增強(qiáng)，組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，降低了牙周組織抵抗、防御細(xì)菌侵襲的能力。這種亞臨床病理改變，可能是糖尿病病人易發(fā)生牙周炎、加重牙周炎發(fā)展的因素之一。3.滋陰活血方劑與尿酸鹽均可使牙周組織中VEGF和IL-6表達(dá)趨于正常，使牙周組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變得以恢復(fù)。4.滋陰活血方劑可