OPN與乳腺癌細胞體外形成血管生成擬態(tài)關系的研究.pdf

1、目的：
　　 骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)在人類乳腺癌細胞中高表達，并可能參與了某些腫瘤細胞血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry，VM)的形成。在本項研究中，我們調查OPN是否在乳腺癌細胞的VM形成中起作用，并探討OPN和VM形成相關蛋白MMP-9和VEGF之間是否有關聯(lián)。
　　 方法：
　　 1、運用脂質體轉染技術，將針對OPN編碼基因的不同序列的重組質粒miR-opn1、miR

2、-opn2、miR-opn3、miR-opn4分別轉染至人乳腺癌細胞株MDA-MB-231中，WB檢測挑選沉默效率最高的質粒進行后續(xù)實驗。
　　 2、實驗分組：正常組(contro1)、轉染試劑對照組(LipLTX)、陰性質粒對照組(miR-neg)和轉染組(miR-opn2)，分別轉染乳腺癌細胞株30h后，收集細胞進行體外三維培養(yǎng)，24h后倒置顯微鏡下觀察各組VM的數(shù)量，并通過PAS染色證實VM的存在。
　　 3、三維

3、培養(yǎng)24h后，提取各實驗組細胞，用RT-PCR、Western Blot技術測定OPN、MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白質的表達量。
　　 結果：
　　 1、miR-opn1、miR-opn2、miR-opn3和miR-opn4分別轉染至人乳腺癌細胞株MDA-MB-231中，熒光顯微鏡觀察結果和WB實驗結果顯示，miR-opn2質粒的沉默效率較其他組高，可進行后期實驗。
　　 2、轉染組(miR-opn2)的

4、MDA-MB-231細胞株形成VM的數(shù)量比正常組、轉染試劑對照組、陰性質粒對照組的明顯減少(P<0.05)，正常組、轉染試劑對照組、陰性質粒對照組組間相比無顯著性差異，說明OPN參與了MDA-MB-231細胞株的VM形成。
　　 3、轉染組(miR-opn2)的MDA-MB-231細胞株OPN、MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表達水平均比正常組、轉染試劑對照組、陰性質粒對照組(miR-neg)明顯下降(P<0.05)，正常組

5、、轉染試劑對照組、陰性質粒對照組(miR-neg)組間相比無顯著差異，提示OPN參與VM的形成很可能是通過影響VM生成相關蛋白MMP-9和VEGF實現(xiàn)的。
　　 結論：
　　 1、體外三維培養(yǎng)模型中人乳腺癌細胞株MDA-MB-231能夠形成典型的PAS染色陽性的VM現(xiàn)象。
　　 2、靶向沉默OPN蛋白能夠有效抑制體外三維培養(yǎng)模式中MDA-MB-231形成VM的數(shù)量，提示OPN蛋白參與了VM的形成。