龍眼肉多糖結(jié)構(gòu)分析及活性初步研究.pdf

1、目的：提取、分離純化龍眼干果果肉多糖，并進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析和抗腫瘤活性及免疫活性的研究，為合理開(kāi)發(fā)和利用龍眼資源提供理論依據(jù)。 方法：采用熱水浸提法和超聲波法對(duì)龍眼肉多糖進(jìn)行提取，并對(duì)兩種方法進(jìn)行比較。采用酶法-結(jié)合Sevage法和蛋白酶水解法兩種方法去蛋白，并進(jìn)行比較；H2O2氧化法去色素純化多糖。用硫酸-苯酚法測(cè)定龍眼肉多糖含量。用DEAE-纖維素柱層析和丙烯葡聚糖凝膠色譜S-300層析對(duì)多糖LYR進(jìn)行分級(jí)純化。利用完全酸水解法對(duì)

2、多糖LYRP2進(jìn)行單糖成分分析。利用高效凝膠滲透色譜法測(cè)定多糖LYRP2分子量。通過(guò)高碘酸氧化及Smith降解、部分酸水解和完全甲基化法，對(duì)LYRP2經(jīng)過(guò)氣相色譜、紅外光譜、氣相-質(zhì)譜檢測(cè)，分析LYRP2的結(jié)構(gòu)。采用MTT法對(duì)龍眼肉多糖進(jìn)行體外的抗腫瘤活性及免疫活性的研究。 結(jié)果：熱水浸提法得到的LYR得率為3.4％，總糖含量為62％;超聲波提取法得到的LYR得率為7.0％，總糖含量為64％。10次酶法-結(jié)合Sevage法蛋白去

3、除率為52％，多糖損失率為39％;而兩次的蛋白酶水解法蛋白去除率為84％，多糖損失率為20％。去色素后的LYR樣品為白色或淡黃色。首次從龍眼中得到兩個(gè)均一多糖組分LYRP2分子量為1.1×105。LYRP2進(jìn)行完全酸水解后的單糖成分為葡萄糖。通過(guò)對(duì)紅外光譜檢測(cè)分析，得知LYRP2具有多糖的典型結(jié)構(gòu)，為β-型端基吡喃環(huán)多糖。通過(guò)高碘酸氧化及Smith降解、部分酸水解和完全甲基化分析，經(jīng)過(guò)氣相色譜、紅外光譜、氣相-質(zhì)譜分析、檢測(cè)得知：LYR

4、P2的結(jié)構(gòu)單元，以β-D-(1→3)-Glcp鍵型為主鏈，在6-O位有β-D-(1→3)-Glcp-β-D-1)-Glcp以及β-D-(1→4)-Glcp-β-1)-Glcp支鏈的多糖，1-Glcp連接主鏈末端。LYRP2-1在5～40 mg/L的濃度范圍內(nèi)對(duì)人腫瘤細(xì)胞SKVO3生長(zhǎng)抑制率均>40％；LYRP2-1的IC50為5.6mg/L。LYRP2-2在5～40 mg/L的濃度范圍內(nèi)對(duì)人腫瘤細(xì)胞SKVO3生長(zhǎng)抑制率均>30％；在40

5、mg/L的劑量下，其生長(zhǎng)抑制率最高，為39.9％。LYRP2-1在320～40 mg/L的濃度范圍內(nèi)對(duì)人腫瘤細(xì)胞HO8910生長(zhǎng)抑制率均>40％; LYRP2-1的IC50為114mg/L。LYRP2-2在320～40 mg/L的濃度范圍內(nèi)對(duì)人腫瘤細(xì)胞HO8910生長(zhǎng)抑制率均>40％; LYRP2-2的IC50為325mg/L。體外單獨(dú)促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用，LYRP2-1和LYRP2-2濃度在3.2～400mg/L范圍內(nèi)，均在

6、400mg/L的劑量下，其刺激指數(shù)最高，分別為124％和140％。體外協(xié)同ConA促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用，LYRP2-1濃度在3.2～400mg/L范圍內(nèi)，16mg/L LYRP2-1與ConA的體外協(xié)同作用，刺激指數(shù)最小，為68％; LYRP2-2濃度在3.2～400mg/L范圍內(nèi)，80mg/L LYRP2-2與ConA的體外協(xié)同作用，刺激指數(shù)最大，為157％。 結(jié)論：超聲波法提取龍眼肉多糖優(yōu)于熱水浸提法；蛋白酶水解法

7、去蛋白優(yōu)于酶法-結(jié)合Sevage法；龍眼肉多糖LYRP2單糖成分是葡萄糖，分子量為1.1×105。LYRP2是β-型端基吡喃環(huán)多糖；LYRP2的結(jié)構(gòu)單元，以β-D-(1→3)-Glcp鍵型為主鏈，在6-O位有β-D-(1→3)-Glcp-β-D-1)-Glcp以及β-D-(1→4)-Glcp-β-D-1)-Glcp支鏈的多糖，1-Glcp連接主鏈末端。LYRP2-1和LYRP2-2體外對(duì)人腫瘤細(xì)胞SKVO3、HO8910均表現(xiàn)明顯的細(xì)胞