移植的人骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)分布與安全性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 在建立人骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系基礎(chǔ)上，觀察人骨髓基質(zhì)細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的分布情況和對(duì)臟器的影響，為人骨髓基質(zhì)細(xì)胞作為干細(xì)胞移植的前期研究和安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 采用密度梯度離心結(jié)合差速貼壁法分離培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、表型特征對(duì)成人骨髓來(lái)源的基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；采用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線分析和成骨誘導(dǎo)分化分析其體外增殖特性和分化潛能。而后建立人骨髓基質(zhì)細(xì)胞靜脈移植的裸鼠模型，觀察受體裸鼠的一般情況，通過(guò)組織

2、學(xué)分析、RT-PCR檢測(cè)人Alu基因和CD45基因等技術(shù)手段，研究移植的骨髓基質(zhì)細(xì)胞體內(nèi)的分布情況和對(duì)臟器的影響。此外，還進(jìn)行安全性檢測(cè)，包括長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)的觀察和成瘤性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。 結(jié)果 體外培養(yǎng)的人骨髓基質(zhì)細(xì)胞為成纖維樣細(xì)胞，細(xì)胞緊密排列呈漩渦狀生長(zhǎng)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD34、CD45為陰性表達(dá)；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線提示第1至第5代人骨髓基質(zhì)細(xì)胞增殖速度無(wú)顯著性差異(P>0.05)；成骨誘導(dǎo)18天后，茜素紅染色可見(jiàn)橙紅色鈣結(jié)節(jié)。在

3、裸鼠移植模型中，輸注第4代體外培養(yǎng)的人骨髓基質(zhì)細(xì)胞后，受體裸鼠一般狀況良好，解剖大體觀、HE染色、瑞氏染色觀察受體組織結(jié)構(gòu)無(wú)異常。RT-PCR檢測(cè)人Alu基因、CD45基因在不同移植時(shí)間相應(yīng)臟器均有表達(dá)。此外，細(xì)胞長(zhǎng)期傳代后出現(xiàn)衰老征象，而無(wú)明顯的成瘤特性。 結(jié)論 采用密度梯度離心結(jié)合差速貼壁法分離、DMEM-LG-10％FBS培養(yǎng)液可成功分離培養(yǎng)含有間充質(zhì)干細(xì)胞的人骨髓基質(zhì)細(xì)胞群。經(jīng)靜脈輸注后，在不同移植時(shí)間檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)