銀屑病(患者)皮膚間充質干細胞生物學特性及mRNA差異表達的研究.pdf

1、目的:研究銀屑病皮膚間充質干細胞(skin-derived mesenchymal stem cells，SMSCs)生物學特性，進一步分析銀屑病SMSCs基因表達譜，了解銀屑病患者皮損微環(huán)境中SMSCs變化，為SMSCs參與銀屑病發(fā)病提供理論依據。
　　 方法:應用酶消化法分離培養(yǎng)銀屑病組與正常對照組SMSCs，并傳代、擴增，收集第3代SMSCs及其培養(yǎng)上清液，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，流式細胞技術檢測細胞免疫表型，分別用

2、成脂、成骨、成軟骨誘導體系鑒定細胞多系分化能力，細胞計數(shù)法繪制第3代細胞生長增殖曲線，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中EGF、TGF-β1濃度。應用基因芯片技術對其mRNA表達譜進行差異基因篩選。RT-PCR法對銀屑病SMSCs部分差異表達基因進行驗證分析。
　　 結果:
　　 ①細胞形態(tài)學特性:倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病組與正常對照組細胞形態(tài)均存在異質性。
　　 ②細胞表面標志物測定:流式細胞儀檢測第3代培養(yǎng)細

3、胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105呈高表達，CD34、CD45及HLA-DR呈低表達。
　　 ③細胞多向分化潛能測定:第3代培養(yǎng)細胞成脂、成骨、成軟骨誘導培養(yǎng)14d，分別用油紅O、茜素紅S、甲苯胺藍染色鑒定脂肪細胞、骨細胞及軟骨細胞，結果均為陽性。
　　 ④細胞增殖能力檢測:細胞生長增殖曲線顯示銀屑病組第3代細胞增殖速度快于正常對照組。
　　 ⑤分泌細胞因子（表皮生長因子、轉化生長因子-

4、β1）水平測定:ELISA試劑盒檢測到銀屑病組SMSCs分泌EGF水平高于對照組(P＜0.05)，分泌TGF-β1水平低于對照組(P＜0.05)。
　　 ⑥基因譜差異表達分析:銀屑病組與正常對照組SMSCs基因表達譜顯著不同，共篩選出1927個差異表達基因(1090個基因表達呈增高趨勢，837個基因呈降低趨勢);其中銀屑病組UHRF1的mRNA水平呈高表達狀態(tài)（P＜0.05）。
　　 結論:
　　 ①本實驗建立了