骨髓間充質干細胞移植對大鼠腦梗死后神經功能恢復及Nogo受體表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:腦梗死又稱缺血性腦卒中,是腦血管病的最常見類型,約占全部腦血管病的70%。中風后,腦組織缺血、缺氧性壞死,出現(xiàn)神經功能缺損。腦梗死后神經的再生問題,日益受到關注。目前研究表明,早期神經元再生失敗的主要原因是存在Nogo、髓鞘相關糖蛋白(MAG)、少突膠質細胞髓鞘糖蛋白(Omgp)等髓磷脂抑制物的過表達。這類抑制物與共同的受體——Nogo受體(Nogo Recepotr,NgR)結合,通過Rho-ROCK途徑產生神經再生抑制作用

2、,所以近年來Nogo或NgR成為了神經修復研究的新靶點。體內實驗表明,抑制Nogo或NgR后,健側腦皮質發(fā)射到腦干及對側脊髓的神經纖維突起可出現(xiàn)代償性增生,從而在解剖學上起代償性修復。體外實驗發(fā)現(xiàn),背根神經節(jié)(dorsal root ganglia,DRG)在含有神經蛋白聚糖(CSPG)、MAG及Nogo-A的培養(yǎng)液中可出現(xiàn)軸突生長受到抑制,也揭示了Nogo在神經再生中的作用。更有趣的是,DRG與MSCs條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)后,可減輕上述抑

3、制物對DRG神經突起生長的抑制。這提示我們,MSC移植可能通過以下途徑促進神經突起的再生:分泌營養(yǎng)因子刺激神經生長;也可能通過抑制細胞外的神經抑制因子起作用。目前MSCs移植修復腦梗死已證明可能有以下機制:細胞替代作用;促進內生源神經干細胞的增殖及遷移;分泌多種神經營養(yǎng)因子,促進新生血管生成,保護梗死后半暗區(qū)的神經元免于死亡,促使軸突生長。其中,MSCs促進神經再生的現(xiàn)象是否通過降低NgR表達起作用的,目前SCI未見報道。所以我們通過動

4、物實驗研究MSCs對NgR表達的影響,初步探討MSCs是否可能通過Nogo/NgR通路來達到修復作用。
   目的:探討MSCs移植治療腦梗死大鼠是否可影響NgR的表達,MSCs是否可能通過Nogo/NgR通路來達到修復作用。
   材料與方法:
   1.采用貼壁分離法提取及培養(yǎng)MSCs,用流式細胞儀法鑒別MSCs,再通過多向分化誘導證實。
   2.通過大腦中動脈電凝術(MCAO)建立大鼠腦梗死模型,

5、造模成功后將大鼠分為非移植組、3×106MSCs移植組、6×106MSCs移植組,同時設立假手術組作為對照組。3×106MSCs移植組和6×106MSCs移植組在造模成功24h后,分別通過靜脈注射移植3×106及6×106個第3代MSCs,移植前用Hoechst標記MSCs。
   3.采用神經損傷嚴重程度評分(NSS)評價各組神經功能恢復狀況。
   4.分別于第1、2、3周取材,石蠟包埋后切片,片厚3μm,Nissl

6、染色觀察病灶周圍神經元的存活情況,用免疫組織化學檢測病灶周圍ki67、GFAP的表達及患側室管膜下區(qū)ki67的表達,免疫組織化學及Western Blotting檢測假手術組、非移植組及MSCs移植組NgR表達的改變。
   結果:
   1.用貼壁分離法可提取到純度高、活性好的MSCs,同時可在體外誘導分化為神經元樣細胞及成骨樣細胞。
   2.MCAO術后1d,右側前肢感覺運動皮質及軀體感覺皮質出現(xiàn)損害,大鼠

7、出現(xiàn)左側前肢不能完全伸直、右側感覺障礙等表現(xiàn)。MCAO術后1w、2、3w,非移植組及MSCs移植組神經功能均可出現(xiàn)恢復,其中3×106MSCs移植組和6×106MSCs移植組兩組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),但較非移植組有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。
   3.與假手術組比較,MCAO術后,患側及對側大腦組織的NgR可出現(xiàn)過表達,以第1周時為明顯。
   4.MSCs移植后1、2、3w,MSCs移植組病灶周圍的神經元及

8、ki67較MCAO非移植組增多,同時患側室管膜下區(qū)的ki67也較非移植組增多,且6×106MSCs移植組較3×106MSCs移植組明顯。
   5.MSCs移植后,大腦皮質NgR表達下降,以患側運動區(qū)皮質、島葉皮質及對側第一運動皮質等為主,且6×106MSCs移植組較3×106移植組下降幅度更大。
   7.Western Blotting顯示,MCAO術后1、2、3w,3×106MSCs移植組病側周圍的NgR表達較非移

9、植組下降(P<0.05)。
   結論:
   1.大鼠MCA皮質支閉塞后,患側的前肢感覺運動皮質及軀體感覺皮質出現(xiàn)壞死,大鼠神經功能受損。
   2.MSCs可促進MCAO模型大鼠的神經功能恢復。
   3.MCAO術后,大鼠出現(xiàn)雙側大腦皮質NgR表達增高,以第1周時為明顯,第2周后出現(xiàn)下降,但仍高于假手術組。
   4.MSCs移植可降低病灶周圍腦皮質功能區(qū)及對側第一運動皮質區(qū)的NgR表達,同

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