西尼羅病毒檢測(cè)體系的初步建立.pdf

1、西尼羅病是由西尼羅病毒引起的人畜共患、蟲(chóng)媒傳播的自然疫源性疾病。早在1937年，Smith Burr及其同事從烏干達(dá)的西尼羅河地區(qū)一個(gè)受感染婦女的血液中首先分離到該病毒，命名為西尼羅病毒。 西尼羅病并不是一種新發(fā)傳染病，只是多數(shù)感染者為隱性感染或低熱等非特異性癥狀，因此并未引起研究人員的注意。直到20世紀(jì)90年代，尤其是1999年在紐約的暴發(fā)流行，導(dǎo)致了人群大規(guī)模感染和高死亡率，并伴隨大量的鳥(niǎo)類(lèi)、家禽、馬和牛等的死亡，才引起全球

2、公共衛(wèi)生界的關(guān)注。 雖然我國(guó)尚無(wú)WND報(bào)道，但由于我國(guó)存在著WND輸入和流行的自然因素和社會(huì)因素，需高度警惕，開(kāi)展WNV監(jiān)測(cè)，防止WND傳入，WNV監(jiān)測(cè)方法的建立對(duì)保護(hù)人群健康，維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定和經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要意義在本研究中，采用RT-PCR擴(kuò)增WNV C-preM蛋白區(qū)基因片段，將其克隆至T載體，測(cè)序并進(jìn)行同源性分析。以陽(yáng)性質(zhì)粒為模板，建立Nested-PCR和Real-time PCR檢測(cè)方法，并進(jìn)行敏感性和特異性檢測(cè)。所建立

3、的Nested-PCR法和Real-time PCR法可分別檢測(cè)到1和10拷貝的西尼羅病毒RNA。而對(duì)其他黃病毒科成員的檢測(cè)均為陰性，表明該方法是特異的。 采用RT-PCR方法，擴(kuò)增WNV E基因D3區(qū)，將其克隆至PET32a載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-D3，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，經(jīng)1.0 mmol/LIPTGG誘導(dǎo)，外源基因以可融性蛋白形式獲得高效表達(dá)。以純化后表達(dá)產(chǎn)物作為診斷抗原包被酶標(biāo)板，建立了檢測(cè)西尼羅熱病毒(