微生物來(lái)源的抗肺炎克雷伯菌活性菌株篩選及次級(jí)代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、革蘭氏陰性菌的耐藥問(wèn)題是臨床抗感染治療的一大憂(yōu)患，近年由于各類(lèi)抗生素的濫用，導(dǎo)致耐藥菌株不斷出現(xiàn)，耐藥性不斷增強(qiáng)。然而，自上世紀(jì)80年代以來(lái)，獲準(zhǔn)上市的新抗菌藥物數(shù)量卻在逐年減少，同時(shí)近年上市的新藥在針對(duì)革蘭氏陰性耐藥菌感染方面未有明顯進(jìn)展。肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae（KPN）是重要的革蘭氏陰性菌耐藥病原菌，在革蘭氏陰性菌臨床分離檢出率中位居第二，并且近10年它已成為耐藥增長(zhǎng)速率最快的腸桿菌科病原菌之一。因此

2、研發(fā)新的抗革蘭氏陰性菌的抗生素，對(duì)解決日益增長(zhǎng)的肺炎克雷伯菌耐藥問(wèn)題具有重要意義。
　　微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物是尋找新藥的重要來(lái)源，其種類(lèi)多樣并且包含豐富的代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類(lèi)型，這些特性都為發(fā)現(xiàn)新的抗耐藥菌化合物提供了可能。
　　本研究以一株產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶SHV-18的肺炎克雷伯菌(ATCC700603)抑制活性為導(dǎo)向，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的16700株微生物（包括放線(xiàn)菌、細(xì)菌、真菌）的33400個(gè)發(fā)酵液樣品進(jìn)行活性篩選，利用微量稀釋法

3、測(cè)定其抗肺炎克雷伯菌( ATCC700603)的活性，初篩共得到93株活性菌株的101個(gè)活性發(fā)酵液樣品，初篩活性菌株陽(yáng)性率為0.56％。對(duì)93株活性菌株進(jìn)行復(fù)篩二次發(fā)酵，采用平板紙片法進(jìn)行活性測(cè)定，復(fù)篩后共得到32株活性菌株的36個(gè)活性發(fā)酵液樣品，復(fù)篩活性菌株陽(yáng)性率為0.20％。對(duì)其中活性較好的17個(gè)發(fā)酵液樣品進(jìn)一步進(jìn)行抗菌譜測(cè)定，發(fā)現(xiàn)有4個(gè)發(fā)酵液樣品I09AA-02146、I09AA-02711、I11AB-02500、I11AB-0

4、2762對(duì)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌，鮑曼不動(dòng)桿菌等革蘭氏陰性病原菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株以及耐藥菌株均表現(xiàn)出良好的抑制活性。因樣品I11AB-02500的活性較強(qiáng)，發(fā)酵活性重復(fù)性好且對(duì)產(chǎn)NDM-1的肺炎克雷伯桿菌ATCC BAA-2146具有良好的抑制作用，因此將菌株I11A-02500(CPCC203718)作為本研究中活性化合物研究的陽(yáng)性菌株。
　　本研究對(duì)I11A-02500進(jìn)行放大發(fā)酵，并對(duì)其進(jìn)行了初步的次級(jí)代謝產(chǎn)物研究