癲癇持續(xù)狀態(tài)對幼年大鼠海馬早期影響及雷公藤甲素保護作用的研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分：癲癇持續(xù)狀態(tài)對幼年發(fā)育期大鼠海馬結(jié)構(gòu)早期影響的研究
　　目的：通過建立氯化鋰-匹羅卡品致癲癇大鼠模型，研究幼年發(fā)育期大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后急性期內(nèi)海馬結(jié)構(gòu)神經(jīng)元損傷變化、星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞活化的時間和年齡依賴性特點，初步探討致癇后大鼠海馬神經(jīng)元損傷變化與膠質(zhì)細胞活化的相關性，為尋求新的癲癇治療方向提供一定的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1．模型建立，選用幼年發(fā)育期健康雄性Wist

2、ar大鼠，生后7天(P7)、生后15天(P15)、生后21天(P21)大鼠各65只，隨機將各年齡段大鼠分為癲癇模型組50只和空白對照組15只，癲癇模型組按照SE后處死時間點分為2h、12h、24h、3d、7d，5個亞組，每一個亞組均隨機分配10只Wistar大鼠，相應空白對照組各亞組均3只Wistar大鼠。各年齡段癲癇模型組大鼠均給予氯化鋰128mg/kg腹腔注射，18到24小時之后，腹腔注射匹羅卡品，P7、P15、P21大鼠每公斤體重

3、匹羅卡品的劑量分別為120mg/kg、80mg/kg、60mg/kg。在匹羅卡品注射前30min，癲癇模型組大鼠均給予硫酸阿托品1mg/kg腹腔注射，用來拮抗外周膽堿能反應，降低死亡率。癲癇持續(xù)狀態(tài)2h后給予10%水合氯醛3～4ml/kg終止發(fā)作，空白對照組均給予等量生理鹽水。
　　2．采用FJB染色法和尼氏染色法觀察各年齡段癲癇模型組及相應空白對照組大鼠海馬神經(jīng)元的形態(tài)學變化。
　　3．采用免疫組化法分析大鼠海馬CA1、C

4、A3、DG區(qū)星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP和小膠質(zhì)細胞標志物IBa-1的表達狀況，GFAP、IBa-1稀釋比均為1:100，采用SABC法。
　　結(jié)果：
　　1．經(jīng)試驗驗證，P7、P15、P21大鼠每公斤體重匹羅卡品致癇有效劑量分別為120mg/kg、80mg/kg、60mg/kg。
　　2．P7、P15大鼠致癇成功率100%，SE后成活率100%; P21大鼠致癇成功率約為80%，成活率約為60%。
　　3．FJB

5、染色和Nissl染色顯示，空白對照組和P7癲癇模型組大鼠海馬神經(jīng)元無損傷變化；SE后2h，P15、P21致癇鼠海馬神經(jīng)元出現(xiàn)變性損傷；P15致癇鼠SE后各時間點海馬神經(jīng)元損傷出現(xiàn)在CA1區(qū)、DG區(qū)，而P21致癇鼠SE后各時間點海馬CA3區(qū)、CA1區(qū)、DG區(qū)神經(jīng)元損傷明顯。
　　4．P7、P15、P21癲癇模型組和空白對照組大鼠海馬各區(qū)均有GFAP、IBa-1表達；空白對照組相比，P2大鼠海馬CA3區(qū)GFAP陽性表達量最多(P<0.

6、05)，P7大鼠海馬各區(qū)IBa-1陽性表達量最少(P<0.05)，P15居中(P<0.05)，P21最多(P<0.05)；癲癇模型組相比，P21致癇大鼠SE后各時間點海馬各區(qū)GFAP、IBa-1陽性表達量最多(P<0.05)，且活化完全；癲癇模型組中，SE后2h膠質(zhì)細胞出現(xiàn)活化，至SE后3d時膠質(zhì)細胞活化顯著。
　　結(jié)論：幼年發(fā)育各期Wistar大鼠的每公斤體重匹羅卡品致癇劑量不同；小年齡組致癇大鼠對癲癇持續(xù)狀態(tài)耐受性較強；幼年發(fā)

7、育期大鼠致癇后，海馬神經(jīng)元的損傷變化和膠質(zhì)細胞的活化呈現(xiàn)出一定的年齡和時間特性；膠質(zhì)細胞的數(shù)量及活化狀態(tài)與神經(jīng)元的損傷變化存有潛在的相關性。
　　第二部分：雷公藤內(nèi)酯醇對匹羅卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護性研究
　　目的：之前的研究發(fā)現(xiàn)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元的損傷丟失與過度的膠質(zhì)細胞活化有很大關聯(lián)性，同時得出SE后3d時星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞活化顯著。在此實驗結(jié)果的基礎上，來探討中藥雷公藤的有效提取物雷公藤內(nèi)酯醇對顳葉癲癇大鼠海

8、馬神經(jīng)元的保護作用及其機制。
　　方法：隨機將70只生后21天的雄性Wistar大鼠分為空白對照組10只，癲癇組及雷公藤內(nèi)酯醇干預組各30只，分別于SE后3d處死，采用Nissl染色、FJB染色法觀察海馬神經(jīng)元的損傷變化；采用免疫組化法檢測海馬組織中星形膠質(zhì)細胞標志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP和小膠質(zhì)細胞標志物鈣離子結(jié)合適配器分子1 IBa-1的表達狀況。
　　結(jié)果：
　　1．癲癇組和藥物干預組海馬神經(jīng)元分別與空白對照組