高血壓基因組掃描及去甲腎上腺素轉運蛋白、緩激肽β2受體基因多態(tài)性與高血壓關系的研究.pdf

1、背景和目的：
　　 高血壓是嚴重危害人類健康的常見復雜疾病之一，已成為世界范圍的重要的公共衛(wèi)生問題。在我國其發(fā)病率高、致殘率高、致死率也高，是腦卒中、冠心病的危險因素。目前認為，高血壓是多種遺傳因素和環(huán)境因素以及基因-基因間，基因-環(huán)境間相互作用的結果，具有遺傳異質性，延遲顯性及種族差異等特征。研究表明血壓變異的30％-50%受到遺傳因素的影響[1]，而這些遺傳因素包括多個基因的作用，每個基因的作用可能是微效的。如果能對高血壓相

2、關基因多態(tài)性與高血壓的相關性進行研究，確定與高血壓相關的位點，就可以通過基因分子生物學等方法對高血壓及其相關疾病采取早預防早診斷和早治療等措施，對患者、患者家庭及社會都具有極重要的意義。
　　 一般認為微效基因作用模式在原發(fā)性高血壓(EH)的遺傳機制中起主要作用，即來自多個位點的大多數(shù)風險等位基因在群體中的發(fā)生頻率都很低，它們之間通過數(shù)量性狀的劑量-效應關系進行相互作用，達到疾病發(fā)生的臨界閾值，共同決定EH的遺傳易感性。目前對高

3、血壓遺傳研究尚無既定的方法模式，其中主要的幾種策略如候選基因克隆、定位候選基因克隆與全基因組掃描、中間表型、動物模型及比較基因組學等。
　　 EH相關的基因多存在于腎素-血管緊張素.醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、交感神經系統(tǒng)、內皮系統(tǒng)和某些信號通路等系統(tǒng)中。交感神經反應性增強與高血壓的形成密切相關。交感神經系統(tǒng)基因多態(tài)性與高血壓的關系成為研究的熱點之一。激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(KKS)是機體重要的調節(jié)系統(tǒng)，廣泛地存在于許多組織和器官中，

4、參與多種生理和病理生理過程，如心血管、腎臟和神經系統(tǒng)的功能調節(jié)，平滑肌收縮、葡萄糖代謝、細胞增殖、炎癥與疼痛及休克過程等。近年來特別是在心血管方面的研究進展很快，許多臨床研究和基礎實驗已證實KKS具有強大的心血管保護作用，如調節(jié)血壓、抑制心肌肥厚的形成、減少缺血再灌注損傷和參與缺血預適應形成。KKS對于增加腎血流及Na+排出具有十分重要的意義。本實驗通過全基因組掃描篩查原發(fā)性高血壓的相關基因位點，并對交感神經系統(tǒng)的去甲腎上腺素轉運蛋白基

5、因及激肽釋放酶.激肽系統(tǒng)的緩激肽β2受體基因多態(tài)位點與高血壓的關系進行分析，為高血壓的發(fā)病機制研究提供線索。
　　 研究方法：
　　 1、高血壓家系及對照組的采集、流行病學問卷調查
　　 在遼寧省阜新地區(qū)篩選兩代或三代以上有高血壓的家系，在家系中選擇高血壓患者(SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，或兩周內服降壓藥者)作為家系高血壓組(n=850)；在阜新地區(qū)收集年齡≥55歲，血壓<140/90mmH

6、g的非家系非高血壓健康人群作為對照組(n=380)，對兩組人群進行流行病學問卷調查。
　　 2、體格檢查
　　 對收集的研究對象進行血壓、身高、體重、腹圍的測量。
　　 3、采外周血行實驗室檢查及DNA提取
　　 對研究對象行外周血的采集，黃色生化管進行血液生化檢查，紫色抗凝管行基因組DNA的提取。
　　 4、DNA濃度測定及DNA混合池構建
　　 用nano-drop分光光度儀對已提取的

7、DNA進行濃度測定，每份樣本分別抽取100ng，在高血壓組(可用樣本740份)和非家系非高血壓組(可用樣本361份)分別構建DNA混合池14個。
　　 5、全基因組掃描
　　 采用Affymetrix SNP6.0芯片(上海晶泰生物技術有限公司)對DNA混合樣本行全基因組掃描，定位SNP位點。
　　 6、目的基因多態(tài)性分析
　　 用聚合酶鏈式反應(PCR)，Sanger測序等方法對Affymetrix S

8、NP6.0芯片不包含的四個位點，即交感神經系統(tǒng)的去甲腎上腺素轉運蛋白基因的rs1805067和rs2397771兩個SNP位點多態(tài)性及激肽釋放酶.激肽系統(tǒng)的緩激肽β2受體基因的rs1799722和rs1046248兩個SNP位點多態(tài)性進行測定，研究其與EH的關系。
　　 實驗結果：
　　 1、高血壓組收縮壓、舒張壓、體重指數(shù)、血肌酐和飲酒百分率高于對照組，年齡低于對照組，差異有顯著性；高血壓組總蛋白、白蛋白、TC、HDL

9、-C、LDL-C、TG、FPG和吸煙百分率均與對照組無顯著性差異。
　　 2、高血壓組和對照組間有兩個位點rs4540261和rs9625367有顯著性差異P<10-5。
　　 3、去甲腎上腺轉運蛋白基因rs1805067和rs2397771兩個位點經PCR擴增后電泳產物分別為640bp和437bp的目的基因片段。rs1805067(A/G)多態(tài)性在高血壓組G占100%，A占0%，在對照組G占100%，A占0%，兩組間沒

10、有差異(P>0.05)。rs2397771(C/G)多態(tài)性在高血壓組G占46.30%，C占53.70%，在對照組G占61.19%，C占39.81%，兩組間有顯著性差異(P<0.05)。
　　 4、緩激肽β2受體基因rs1799722和rs1046248兩個位點經PCR擴增后電泳產物分別為395bp和369bp的目的基因片段。rs1799722(C/T)多態(tài)性在高血壓組T占77.78%，C占22.23%，在對照組T占64.81%，

11、C占35.12%，兩組間有顯著性差異(P<0.05)。rs1046248(C/T)多態(tài)性在高血壓組C占100%，T占0%，在對照組C占100%，T占O%，兩組間沒有差異(P>0.05)。
　　 結論：
　　 1、遼寧省阜新地區(qū)EH發(fā)病可能與體重指數(shù)、飲酒有關，高血壓患者的腎臟功能損傷較早。
　　 2、遼寧省阜新地區(qū)EH可能與以下SNP位點有關：rs：4540261；rs：9625367。
　　 3、遼寧省