腫瘤抑制基因XAF1在非小細胞肺癌中表達的初步研究.pdf

1、目的：研究腫瘤抑制基因XAF1在非小細胞肺癌中的表達,探討XAF1在非小細胞肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,為尋找肺癌靶向基因治療的新靶點提供理論依據。
　　 方法：通過收集臨床手術切除的新鮮非小細胞肺癌(NSCLC)組織(病理學檢查明確為鱗癌和腺癌)51例,按癌組織、癌旁組織(距癌組織2cm內的非癌組織)和正常肺組織(距癌組織5cm以上)三個不同部位無菌取材,采用半定量逆轉錄.聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測15例NSCLC肺癌組織

2、、癌旁組織及正常肺組織中XAF1、XIAP mRNA表達情況；應用S-P免疫組化檢測51例肺癌患者癌組織、癌旁組織及正常肺組織中XAF1蛋白表達,分析其表達和臨床病理特征相關性；利用重組腺病毒Ad5/F35-XAF1介導轉染人肺腺癌細胞株A549和肺鱗癌細胞株SK-MES-1,采用RT-PCR定性檢測肺癌細胞轉染前、后XAF1 mRNA及蛋白表達變化,MTT及流式細胞計量法分別檢測轉染前、后肺癌細胞增殖和凋亡變化。
　　 結果：

3、(1)RT-PCR檢測的15例新鮮肺癌組織中,3例XAF1、XIAP mRNA無表達,在表達的12例患者中:肺癌癌組織較癌鄰近正常肺組織XAF1 mRNA表達水平下調(P<0.05),表達強度由0.73±0.16下調為0.48±0.14,下調34.25％；癌旁組織較癌鄰近正常組織無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；XIAP mRNA的表達癌組織明顯高于癌鄰近正常肺組織(P<0.05),表達強度由0.50±0.11上調為0.72±0.14,上調

4、30.56％。(2)S-P免疫組化結果顯示:癌組織中XAF1蛋白陽性表達28例(28/51,54.9％),癌旁組織40例(40/51,78.4％),正常組織中44例(44/51,86.7％),癌組織中XAF1表達強度均弱于癌旁組織及正常肺組織(p<0.05),而癌旁組織與正常肺組織表達強度無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。(3)XAF1在A549和SK-MES-1細胞中表達較弱或缺如,經重組腺病毒Ad5/F35-XAF1轉染后RT-PCR檢

5、測顯示,XAF1 mRNA及蛋白表達顯著增強,且隨劑量依賴性增強,在SK-MES-1細胞中表達更顯著；(4)MTT法檢測轉染腺病毒XAF1肺癌細胞生長增殖受抑制,且呈有效滴度依賴性抑制增強；流式細胞計量法檢測不同滴度Ad5/F35-XAF1轉染后,在致死滴度范圍內肺癌細胞凋亡隨滴度增加而逐漸增強。
　　 結論：①本研究結果表明,非小細胞肺癌中腫瘤抑制基因XAF1表達降低或缺如,XIAP基因在肺癌組織中表達明顯增強,XIAP作為凋

6、亡抑制基因現已被肯定[1],而XAF1在肺癌發(fā)生、發(fā)展中具有促凋亡作用。②腫瘤抑制基因XAF1在NSCLC組織中的表達下調與腫瘤惡性程度、病理類型、分期、淋巴結轉移有關,XAF1有望成為預測肺癌預后的一個新的腫瘤標志物。③重組腺病毒Ad5/F35-XAF1及對照腺病毒Ad5/F35-EGFP,可成功對肺癌細胞株進行瞬時轉染,檢測肺癌細胞中XAF1 mRNA及蛋白表達較轉染前明顯增強,可見重組腺病毒是適用于NSCLC基因治療一良好載體。④