cDNA微矩陣技術的建立及其對人食管鱗狀上皮細胞癌基因表達譜的研究.pdf

1、背景與目的： 食管癌(Esophageal Carcinoma)是人類最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在中國位居第四位，嚴重危害人類健康。隨著現(xiàn)代生物技術的發(fā)展，食管癌的分子機制研究取得了長足進展，提示食管癌的發(fā)生是一個多階段、多遺傳變異累積的過程。尤其是近年來發(fā)展起來的cDNA微矩陣技術已經(jīng)將我們帶進了食管癌的內(nèi)部世界，對于闡明其發(fā)生過程和癌變機理有重要作用。同時對食管癌基因表達譜的準確定性將成就一個精確的分類系統(tǒng)，產(chǎn)生用于篩選

2、檢驗的新診斷標記物和新型治療靶點。目前，利用這項技術已積累了大量文獻，但國內(nèi)的研究其質(zhì)量與國際先進水平相比尚存在較大差距，具體表現(xiàn)在：(1)、國內(nèi)迄今為止的所有腫瘤學芯片研究均采用組織勻漿法獲取腫瘤組織，無法克服其異質(zhì)性缺點，這極大地影響了目的細胞基因表達譜的準確性；(2)、難以對小范圍病變的目的細胞進行研究；(3)對微量的組織標本，如微小的活檢組織無能為力。為縮小與國際先進水平的差距，也為了準確地了解河南籍食管癌基因mRNA水平表達的

3、整體面貌，本研究特建立了LCM-GMA(激光捕獲顯微分離-高可信度全基因組mRNA擴增)聯(lián)合cDNA微陣矩技術，并分析了15例河南籍食管癌患者腫瘤細胞基因表達譜，填補其空白。 結論： 1、本研究建立的cDNA芯片平臺是可信、也是可行的，在篩選食管癌相關基因表達譜時具有快速、高通量、高敏度等特點。 2、LCM是一種有效地研究特定細胞中基因表達變化的方法，克服了組織勻漿法及顯微鏡下針挑技術所具有的異質(zhì)性缺點，使獲取“

4、純的目的細胞”成為現(xiàn)實。T7RNA聚合酶介導的高可信度全基因組mRNA擴增(GMA)技術可進行線性化mRNA擴增而不改變其各基因在原始樣本中的組成成分。我們建立的LCM-GMA聯(lián)合cDNA微矩陣技術不儀可獲取“精確”的基因表達譜，而且有利于研究微小的病變組織，對于癌前病變、原位癌及浸潤癌基因表達譜變化的研究是一個有力的技術手段。LCM-GMA-定量RT-PCR技術則能有效地分析特定細胞中單個目標基因的表達變化。 3、高通量的基因

5、芯片技術篩選出大量ESCC相關基因，表明多個基因表達變化在食管癌發(fā)生中起作用，基因差異表達譜的分析對于闡明食管癌的遺傳變異及其機理具有重要作用。15例ESCC表達譜提示的許多差異基因在ECal09中有類似改變，尤其是MET和PTPN2這兩個基因在細胞株和原發(fā)性食管癌組織中有一致的表達，體現(xiàn)了食管癌有共同的基因變化基礎。食管癌淋巴道轉移相關基因、分化相關基因及進展相關基因的篩選有助于找到ESCC發(fā)生、發(fā)展的關鍵基因或通路，并可作為ESCC