利用RNAi及轉(zhuǎn)基因技術抑制BmNPV增殖的研究.pdf

1、RNAi，又稱RNA干預或者RNA干涉，是dsRNA介導的特異性基因表達沉默現(xiàn)象。為了利用RNAi技術提高家蠶對核型多角體病毒(BmNPV)的抗性，根據(jù)BmNPV復制必需基因．ie-1、lef-1設計其相應的dsRNA(21 bp)，構建了帶有je-1 daRNA表達盒的轉(zhuǎn)基因載體piggyantiIE-neo和同時帶有je-1 dsRNA表達盒、lef-1 dsRNA表達盒的轉(zhuǎn)基因載體piggyantiIE-lef1—neo。研究結(jié)果

2、顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE--neo BmN細胞，對BmNPV的增殖表現(xiàn)出抑制作用，穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE-lef1-neo細胞對BmNPV增殖的抑制效果優(yōu)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)化piggyantiIE-neo細胞，但在病毒感染后期，均由于病毒恢復增殖導致RNAi的效果被掩蓋。通過反向PCR分析了外源DNA片段插入基因組位點，結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)化細胞中，外源DNA可通過隨機整合或按照piggyBac特定的轉(zhuǎn)座位點TTAA插入細胞基因組。