天麻鉤藤飲對腦灌注不足大鼠VEGF的表達和神經(jīng)發(fā)生的影響.pdf

1、背景與目的:臨床以及實驗研究證實了慢性腦灌注不足與認知功能障礙之間的關系,慢性腦灌注不足是導致認知功能障礙的一個重要因素,是血管性認知障礙發(fā)展過程中的一個重要的病理過程.通過永久性雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(permanentocclusion of bilateral common carotid aaefies,2-vessel occlusion,2VO)建立的2VO模型導致了慢性中度腦血流的減少,構(gòu)建了一個慢性腦灌注不足的模型.2VO所導

2、致的腦組織的主要病理改變?yōu)?白質(zhì)疏松,膠質(zhì)增生,皮質(zhì)、海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的固縮、缺失;在行為學上表現(xiàn)為長期的學習記憶能力障礙,因此是研究輕度認知功能障礙的一個良好的模型.天麻鉤藤飲這一古老的中藥組方顯示了較好的臨床應用效果,可以改善患者的認知,但是基礎研究甚少,作用機制不甚清楚.韓國學者進行的體外研究表明,鉤藤可以促進人臍靜脈內(nèi)皮細胞VEGF的基因表達和蛋白分泌,那么天麻鉤藤飲這一中藥復方組分是否也發(fā)揮了這一作用呢? 是否還有其它的作用

3、機制參與了其神經(jīng)保護功能呢? 因此,本研究擬通過建立大鼠腦灌注不足模型,觀察天麻鉤藤飲早期干預對腦灌注不足大鼠學習記憶能力的影響,以及藥物干預對腦缺血后血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)的表達和海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響,探討其可能的神經(jīng)保護機制. 材料與方法:健康SD大鼠,144只,雌雄不限,體重342±16g.實驗動物隨機分為正常對照組、假手術組、模型組和治療組,共

4、4組.每組又分為2周、4周、8周3個時間點進行觀察.采用永久性雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎制各腦灌注不足模型.在造模前、后對動物進行Moms水迷宮評價,以篩選合格動物入組.治療組于造模后次日開始給予天麻鉤藤飲(5g/kg'd)灌胃,分別灌胃2周,4周,8周.假手術組,模型組給予相同體積蒸餾水灌胃;正常對照組不予灌胃處理.在各個時間點結(jié)束后行水迷宮,對大鼠的學習記憶能力進行評價.BrdlU標記S期細胞,觀察海馬齒狀回細胞增殖.動物于處死前12h內(nèi),腹

5、腔注射5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdlJ)(50 mg/kg),1次/4 h,共3次,末次注射4h后處死.免疫組化觀察3個時間點各組大鼠的VEGF.及VEGFR-2/Flk-1的表達變化,以及BrdU標記的海馬齒狀回新生細胞數(shù)量的變化.免疫熒光檢測神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)(標記神經(jīng)元)與'VEGF的共表達,即觀察腦缺血是否誘導了神經(jīng)元表達VEG

6、F. 結(jié)果:(1)行為學結(jié)果顯示,模型組的潛伏期均明顯延長,與假手術組大鼠比較具有顯著性差異(P<0.05),表明大鼠學習記憶能力明顯受損;治療組大鼠與模型組比較,潛伏期明顯縮短(P<0.05),表明藥物干預改善了腦缺血后大鼠的學習記憶能力.(2)免疫組化結(jié)果顯示,模型組VEGF的表達較假手術組明顯增多(P<0.05),隨后呈現(xiàn)遞減的趨勢.治療組VEGF的表達較模型組明顯增多(P<0.05或p<0.01).2周治療組的VEGF的

7、表達較相應模型組明顯增多,不僅表達的細胞數(shù)量多,且胞漿豐富,染色濃密,部分呈顆粒狀,并且這種高表達可持續(xù)到4周,8周治療組仍呈中度表達.模型組Flk-1的表達較假手術組明顯增多(.P<0.05);治療組Flk-1的表達較模型組明顯增多(P<0.05或p<0.01).(3)模型組的BrdtJ陽性細胞較假手術組明顯增多(P<0.05),治療組較模型組明顯增多(p<0.05或p<0.01),增生的細胞主要分布于海馬齒狀回顆粒細胞層亞顆粒增生帶

8、中.模型組的BrdtU陽性細胞隨著時間的推移呈現(xiàn)減少的趨勢,而治療組的BrdtI陽性細胞卻未隨著時間的延長則呈現(xiàn)減少的趨勢.(4)免疫熒光觀察到模型組神經(jīng)元VEGF表達增加. 結(jié)論:腦缺血可以誘導神經(jīng)元VEGF表達增加,可能是腦缺血后內(nèi)源性的神經(jīng)保護機制之一;天麻鉤藤飲可以改善腦灌注不足后大鼠的學習記憶能力;天麻鉤藤飲可以促進腦缺血后VEGF 及Flk-1的表達增加,可能通過該途徑發(fā)揮腦保護功能;天麻鉤藤飲可以促進海馬齒狀回神經(jīng)