IN-1及NT-3聯(lián)合作用后軸突再生修復(fù)與c-fos、c-jun基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的關(guān)系.pdf

1、脊髓損傷后截癱病人的治療是目前臨床治療中的重大課題，影響神經(jīng)再生和有效修復(fù)的因素相當復(fù)雜，損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕形成、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏、抑制軸突生長乃至妨礙軸突正確尋靶的抑制性分子的存在、促損傷基因的過度表達以及抗損傷基因和促軸突生長基因的表達不足等因素均能影響中樞神經(jīng)再生。對脊髓損傷后修復(fù)研究的現(xiàn)狀和趨勢主要圍繞以下幾個方面：①促進誘導(dǎo)軸突的生長，如給予多種促進神經(jīng)生長的神經(jīng)營養(yǎng)因子或促進神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達、為再生的軸突提供橋梁及管道、提供能

2、支持引導(dǎo)神經(jīng)生長的雪旺氏細胞及細胞外基質(zhì)成分。②消除抑制軸突生長的因素，這些抑制因素主要與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓磷脂及損傷后形成的空洞和膠質(zhì)瘢痕有關(guān)。 IN-1為髓磷脂相關(guān)生長阻逆蛋白抗體，目前國內(nèi)外學(xué)著都傾向于其對抗相應(yīng)抗原方面的研究，但其促進軸突生長是否還有其他的機制?為此，本實驗從另一個角度出發(fā)，通過IN-1以及和NT-3聯(lián)合作用，觀察其是否會對即刻早期基因c-fos及c-jun的表達產(chǎn)生影響，并且從多個方面對脊髓損傷恢復(fù)程度進

3、行評價。 第一章IN-1及NT-3聯(lián)合作用后c-fos及c-jun表達的變化 目的：從基因及蛋白水平探討脊髓損傷后給予IN-1以及和NT-3聯(lián)合作用后c-fos及c-jun的表達有無變化。 材料和方法：清潔型Sprague-Dawley(sD)大鼠240只，隨機分為手術(shù)對照組(n=80)、IN-1組(n=80)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=80)。每個組中大鼠按照手術(shù)后時間隨機平均分為15min、30mi

4、n、1h、2h、4h、6h、8h、12h 8個小組，每個小組10只。所有大鼠在相當于T<,8>椎板水平用做好標記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3。手術(shù)對照組、IN-1組和聯(lián)合作用組在脊髓橫斷處頭側(cè)分別注入生理鹽水、IN-1及工N-1和NT-3。所有大鼠在相應(yīng)時間點處死，取出脊髓組織。其中5只用RT-PeR檢測c-fos、c-jun基因的表達，另外5只用Western blot檢測c-fos、c-jun蛋白的表達。 結(jié)論：NT-3、

5、IN-1作用機制之一可能通過抑制c-fos表達，促進c-jun表達對脊髓損傷起保護作用。 第二章 IN-1及NT-3聯(lián)合作用后促軸突生長相關(guān)基因表達的變化 目的：研究IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后GAP-43、NGF、bFGF基因表達的變化。 材料和方法：清潔型SD大鼠90只，隨機分為手術(shù)對照組(n=30)、IN-1組(n=30)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=30)，每組又按照手術(shù)后時間隨機平均分為1d、4

6、d、7d、14d、21d和28d六個小組，每個小組5只。所有大鼠首先行蛛網(wǎng)膜下腔置管，然后在相當于T<,8>椎板水平用做好標記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3。其中手術(shù)對照組通過置管每天注入生理鹽水30μl，而IN-1組每天用注入IN-1 24μ1，IN-1和NT-3聯(lián)合作用組，每天注入IN-1 24μl和NT-33μl，每天分為早、中、晚三次注射，最長持續(xù)1周。分別于相應(yīng)時間點處死動物，用RT-PCR檢測GAP-43、NGF、bFGF基

7、因表達的變化，結(jié)果采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學(xué)處理，P<0.05結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：IN-1以及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后可能通過上調(diào)GAP-43、NGF、bFGF mRNA的表達，從而對脊髓損傷后軸突再生起一定的促進作用。 第三章脊髓損傷后脊髓功能恢復(fù)的評價 目的：從多個角度對給予IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后脊髓功能恢復(fù)的情況進行評價。 材料和方法：清潔型SD大鼠18只，隨機分為手術(shù)對照組(n=6)、IN

8、-1組(n=6)及IN-1和NT-3組聯(lián)合作用組(n=6)，動物模型的制作、給藥途徑及時間同第二章。但所有大鼠于術(shù)后14d時在右側(cè)感覺運動皮層注射示蹤劑BDA順行示蹤CST纖維。在手術(shù)前及手術(shù)后1d、1w、2w、3w及4w，采用BBB(Basso)評分評價運動功能，然后取出脊髓組織采用免疫組化染色觀察神經(jīng)元中絲蛋白(NF)及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達、HE染色及：BDA組織化學(xué)反應(yīng)。 結(jié)論：IN-1及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后可

9、以促進脊髓損傷后軸突的再生，促進運動功能的恢復(fù)。 本實驗采用皮質(zhì)脊髓束橫斷模型，探討了IN-1以及聯(lián)合應(yīng)用NT-3后對即刻早期基因c-fos和c-jun mRNA及其蛋白表達的影響，并對二者的目的基因GAP-43、bFGF和NGF的表達進行了研究，最后從多個方面對脊髓恢復(fù)的情況進行了評價。結(jié)果顯示：IN-1和NT-3抑制c-fos及其蛋白的表達，促進c-jun及其蛋白的表達，進一步促進了其目的基因GAP-43、bFGF和NGF的