CO-,2-處理對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲黏附能力的影響.pdf

1、背景與目的： 腫瘤細(xì)胞黏附能力的改變，是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特征，可以影響到腫瘤細(xì)胞的脫落、種植轉(zhuǎn)移和侵襲。近年來(lái)，腹腔鏡手術(shù)廣泛在臨床開展，并已拓展到婦科惡性腫瘤治療領(lǐng)域。自從有報(bào)道腫瘤腹腔鏡手術(shù)后出現(xiàn)穿刺點(diǎn)轉(zhuǎn)移(Portsitemetastasis，PSM)的情況以來(lái)⑴，對(duì)腹腔鏡手術(shù)在婦科腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移方面的影響也逐漸開始受到關(guān)注。由此我們將子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞直接暴露于純CO2環(huán)境，對(duì)該環(huán)境下體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞以及氣腹條件

2、下腫瘤細(xì)胞裸鼠體內(nèi)移植后細(xì)胞黏附能力的改變進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，以探討CO2環(huán)境對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的黏附作用的影響及其機(jī)制。 研究方法： 首先研究CO2氣腹環(huán)境對(duì)體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲黏附能力的影響。取處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的癌細(xì)胞，經(jīng)消化、計(jì)數(shù)后調(diào)整為所需要的濃度，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中。細(xì)胞按在人工CO2環(huán)境中培養(yǎng)時(shí)間分為4組：(1)對(duì)照組，培養(yǎng)瓶直接放入37℃，5％CO2孵育箱中孵育。(2)2小時(shí)組，培養(yǎng)瓶中通入12mmHg、100％C

3、O2氣體，37℃培養(yǎng)，2h后排氣。(3)4小時(shí)組，培養(yǎng)瓶中通入12mmHg、100％CO2氣體，37℃培養(yǎng)，4h后排氣。(4)6小時(shí)組，培養(yǎng)瓶中通入12mmHg、100％CO2氣體，37℃培養(yǎng)，6h后排氣。分別于第1-9天每天取各組細(xì)胞用MTT法測(cè)定各組的吸光值，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。采用免疫熒光法檢測(cè)各組細(xì)胞中β1-整合素與E-鈣粘素的定位以及表達(dá)情況。同時(shí)利用細(xì)胞基質(zhì)黏附試驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞的黏附力。 其次研究CO2氣腹環(huán)境對(duì)子宮內(nèi)

4、膜癌裸鼠移植瘤侵襲黏附的影響。取30只裸鼠分為3組，1％異戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉后進(jìn)行處理。(1)開腹組(10只)，進(jìn)腹后將小腸外置腹腔5分鐘放回腹腔并縫合，右下腹腔注射腫瘤細(xì)胞。40分鐘后排除氣體。(2)40分鐘氣腹組(10只)，經(jīng)腹腔內(nèi)灌注CO2氣體形成4mmHg的腹腔壓力建立人工氣腹5分鐘后，右下腹腔注射腫瘤細(xì)胞。40分鐘后排出氣體。(3)80分鐘氣腹組(10只)，經(jīng)腹腔內(nèi)灌注CO2氣體形成4mmHg的腹腔壓力建立人工氣腹5分鐘

5、后，右下腹腔注射腫瘤細(xì)胞。80分鐘后排出氣體。記錄每只裸鼠成瘤時(shí)間，四周后，取出移植瘤，一部分進(jìn)行石蠟切片，HE染色觀察移植瘤組織形態(tài)，一部分進(jìn)行冰凍切片，用免疫熒光法檢測(cè)各組腫瘤標(biāo)本中的β1-整合素與E-鈣粘素的表達(dá)，進(jìn)行定量分析。 結(jié)果： 在體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中，通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，可以看到試驗(yàn)三組的光密度在開始的1-4天大多顯著低于對(duì)照組，隨時(shí)間延長(zhǎng)，吸光值有減小的趨勢(shì)。自第五天開始，試驗(yàn)三組的細(xì)胞吸光值

6、高于對(duì)照組，(P＜0.05，除了第五、第六天，2h組和對(duì)照組之間)，并隨CO2處理時(shí)間延長(zhǎng)，吸光值有增大的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。β1-整合素與E-鈣粘素在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的表達(dá)(間接免疫熒光染色)檢測(cè)中可以看β1-整合素陽(yáng)性細(xì)胞為綠色熒光，表達(dá)定位主要在胞膜與胞漿。試驗(yàn)三組的平均吸光度值均明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)，試驗(yàn)三組之間只有2h組與6h組之間有差異，但平均值有隨氣腹時(shí)間延長(zhǎng)，β1-整合素表達(dá)降低的趨勢(shì)。E-鈣粘素在子宮內(nèi)膜癌

7、細(xì)胞的表達(dá)也在胞膜與胞質(zhì)，陽(yáng)性細(xì)胞為綠色熒光。試驗(yàn)三組的平均吸光度值均顯著小于對(duì)照組，對(duì)照三組之間，2h組與6h組、4h與6h組之間有差異，表現(xiàn)出時(shí)間依賴的表達(dá)減少。細(xì)胞基質(zhì)黏附試驗(yàn)中可以看到在60min時(shí)，試驗(yàn)三組的黏附率均顯著高于對(duì)照組，(P＜0.01)，而試驗(yàn)三組之間除了2h組與4h組之間有差異外均沒(méi)有差異性，(P＞0.05)。在120min時(shí)，試驗(yàn)三組的黏附率均高于對(duì)照組，(P＜0.05)試驗(yàn)三組之間均無(wú)差異(P＞0.05)，但

8、是表現(xiàn)出隨氣腹時(shí)間延長(zhǎng)黏附力增加的趨勢(shì)。 在裸鼠移植瘤的研究中，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)氣腹組成瘤時(shí)間比開腹組短(P＜0.05)，HE染色中氣腹組腫瘤組織中血管多。β1-整合素在子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤組織的表達(dá)，氣腹二組的平均光密度值均顯著小于開腹組(P＜0.01)，80分鐘組表達(dá)低于40分鐘組(P＜0.05)。β1-整合素在子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤組織的表達(dá)表現(xiàn)出隨氣腹時(shí)間延長(zhǎng)的表達(dá)降低。E-鈣粘素在子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤組織的表達(dá)與β1-整合素的相