循環(huán)microRNA用于低氧性肺動脈高壓早期診斷的實驗研究.pdf

1、研究目的：模擬6,000米海拔低壓低氧條件，建立低壓低氧誘發(fā)肺動脈高壓（HPH）的大鼠模型，研究低壓低氧暴露條件下HPH模型大鼠循環(huán)miRNA表達譜特征及其與HPH病理變化的相關(guān)性，探索循環(huán)miRNA作為HPH診斷生物標志物的可行性。
　　研究方法：1．隨機將120只雄性6周齡SD大鼠分為低氧4d、7d、10d、14d和21d暴露組及各應時點對照組，置人工氣候艙常規(guī)飼養(yǎng)，繼以模擬6,000m海拔進行低壓低氧暴露，按分組時點定時采用

2、直接測壓法檢測平均肺動脈壓（mPAP）并采集血液及組織標本，心肺組織標本經(jīng)固定、包埋后進行HE染色及病理分析。2．依據(jù)低壓低氧后mPAP的變化，取低氧14d暴露組及對照組大鼠血清標本，利用基因芯片技術(shù)進行循環(huán)miRNA表達譜檢測，不同組別間循環(huán)miRNA表達譜差異分析采用聚類分析。3．利用熒光定量PCR技術(shù)對候選循環(huán)miRNA進行驗證，采用相對定量法進行數(shù)據(jù)分析。
　　研究結(jié)果：1.低壓低氧條件暴露10d、14d、21d的SD大鼠

3、mPAP、右心室肥厚指數(shù)（RVHI）及肺小動脈血管壁厚占外徑比值（MT％）較同時點對照組顯著升高（P＜0.01）。2.基因芯片結(jié)果顯示，累計從大鼠血清中檢測到723種循環(huán)miRNAs，按照FC＞2、Flag/Call值＞3及P＜0.05的標準，從低氧14d組及對照組大鼠間篩選出6種差異化表達的miRNAs，其中低氧組中表達上調(diào)的miRNA有3種（let-7d、miR-451、miR-505），表達下調(diào)的miRNA有3種（miR-455-

4、3p、miR-455-5P、miR-214）。3.熒光定量PCR定量驗證結(jié)果顯示，與對照組相比，低氧14d組大鼠血清中 miR-451、miR-505、let-7d表達上調(diào)（P＜0.01），miR-214表達下調(diào)（P＜0.05），miR-455和miR-455-5p表達與對照組相比無顯著差異；ROC曲線表明，miR-451、miR-505及l(fā)et-7d的用于鑒別低氧性HPH大鼠和對照組大鼠的曲線下面積（AUC）均大于0.8，且與機體脂質(zhì)