上調胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1對子宮內膜癌細胞系HEC-1A生物學功能的影響.pdf

1、背景與目的
　　近些年來子宮內膜腺癌的發(fā)病率逐年上升。肥胖，高血壓，糖尿病和血脂異常的多種危險因素共同構成的代謝綜合征與子宮內膜腺癌的發(fā)病密切相關。而胰島素抵抗是代謝綜合征的中心環(huán)節(jié)。胰島素樣生長因子結合蛋白(insulinlikegrowthfactorbindingproteins，IGFBPs)是胰島素樣生長因子(insulin-likegrowthfactor，IGF)體系中的重要成員，其中包括與IGF有較高的結合能力的I

2、GFBP1-6，及新近發(fā)現的與胰島素有較高結合能力的IGFBP7-15，又被稱為胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白(insulinlikegrowthfactorbindingprotein-relatedprotein，IGFBP-rP)，其中研究最多最重要的是1GFBP-rP1，與IGFBP1-6相比，1GFBP-rP1與IGF1和IGF2的結合能力分別要弱5倍和20-25倍，但與胰島素的結合能力要強500倍。胰島素和IGFBP-rP

3、1結合后使胰島素降低或喪失正常生理作用，導致機體胰島素敏感性下降，引起胰島素抵抗，從而參與一些惡性腫瘤如結腸癌、乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展，并且高胰島素血癥和低IGFBP-rP1水平是子宮內膜癌的高危因素。但是1GFBP-rP1在子宮內膜癌細胞發(fā)揮何種作用尚不清楚，因此，本研究應用脂質體介導的基因轉染方法將重組質粒pEX-2-IGFBP-rP1轉染1GFBP-rP1低表達的子宮內膜癌細胞系HEC-1A，觀察上調1GFBP-rP1對子宮內膜癌細胞

4、系HEC-1A的增殖速率，凋亡及細胞周期的影響，探討1GFBP-rP1在子宮內膜癌中發(fā)揮的具體作用。
　　方法
　　1.細胞轉染:應用脂質體介導的基因轉染方法將重組質粒轉染子宮內膜癌細胞系HEC-1A，分為三組:轉染pEX-2-IGFBP-rP1組、轉染空質粒組、空白對照組（僅轉染試劑），并用熒光顯微鏡觀察轉染效率;
　　2.應用QRT-PCR技術檢測各組細胞中IGFBP-rP1的RNA表達;
　　3.應用蛋白印

5、跡法(WesternBlot)測定各組細胞IGFBP-rP1蛋白表達;
　　4.應用四甲基偶氮唑藍(MTT)法分別檢測各組細胞24h、48h、72h增殖抑制率;
　　5.采用流式細胞技術應用AnnexinV-APC/PI雙染法測定各組細胞的凋亡率。采用PI單染法測定各組細胞的細胞周期;
　　6.統(tǒng)計學方法:應用SPSS16.0軟件進行數據統(tǒng)計分析，所得結果以(X)±s表示。采用重復測量的方差分析來比較各組細胞的增殖抑制

6、率，用單因素方差分析比較各組細胞的mRNA，蛋白表達，細胞凋亡率和細胞周期，兩兩比較采用LSD法。
　　結果
　　1.轉染pEX-2-IGFBP-rP1組IGFBP-rP1mRNA的相對拷貝量為:2.699±0.293，蛋白相對表達量為:1.126±0.074與轉染空質粒組(1.296±0.169，0.889±0.040)及空白對照組(1.031±0.301，0.884±0.043)相比明顯升高，且差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.

7、01）;
　　2.轉染pEX-2-IGFBP-rP1組24h，48h，72h增殖抑制率分別為:(37.3±5.4)％、(39.9±4.7)％、(38.0±5.3)％，與轉染空質粒組(3.6±0.6)％，(4.0±0.5)％，(3.3±0.6)％和空白對照組(2.7±0.3)％，(3.2±0.2)％，(2.4±0.2)％相比，增殖抑制率明顯上升，且差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.01）;
　　3.轉染后48h，轉染pEX-2-IG

8、FBP-rP1組凋亡率為(20.667±2.055)％，明顯高于轉染空質粒組(3.967±0.351)％及空白對照組(4.967±0.252)％，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01);
　　4.轉染pEX-2-IGFBP-rP1組S+G2/M期細胞的比例為:(30.980±1.461)％，明顯低于轉染空質粒組(38.797±2.419)％和空白對照組(37.800±0.350)％，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。
　　結論